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SN_T 3970-2014出口食品中白色念珠菌检测方法.pdf

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SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3970—2014出口食品中白色念珠菌检测方法Determination of candida albicans in foods for export2014-04-09 发布2014-11-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3970—2014前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准主要起草单位:中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。本标准主要起草人:段效辉、许红岩、刘宁、祝素珍、李兆杰、刘金华、曹鹏、鲁闽、王颖。I SN/T 3970—2014出口食品中自色念珠菌检测方法1范围本标准规定了出口食品中白色念珠菌的检测方法。本标准适用于出口食品中白色念珠菌的定性检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T1538.1培养基制备指南第1部分:实验室培养基制备质量保证通则SN/T1538.2培养基制备指南第2部分:培养基性能测试实用指南3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1白色念珠菌Candidaalbicans又名白假丝酵母,有酵母相和菌丝相的双相型真菌,能形成芽管、厚膜孢子,参见附录B。3.2芽管germ tube细胞发芽时伸展出的无隔壁的管状构造。3.3厚膜孢子clamydospore营养细胞原来的壁变厚且贮有丰富物质所形成的休眠期的孢子,由菌丝内胞浆浓缩和胞壁增厚形成。4设备和材料4.1高压灭菌锅。4.2均质器。4.3生物安全柜:生物安全ⅡI级。4.4恒温培养箱:25℃±1℃、32.5℃±2.5℃、37℃±1℃。4.5显微镜。4.6天平:精度0.1g。4.7无菌移液管:10mL(具0.1mL刻度)。4.8无菌平皿:直径90mm(或其他商业用一次性无菌平皿)。4.9镊子。4.10接种环。1 SN/T3970—20144.11剪刀。4.12载玻片。4.13盖玻片。4.14酒精灯。4.15均质袋或均质瓶。培养基和试剂5除另有规定外,水为双蒸水。5.1液体沙氏培养基:见A.2。5.2TTC(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride)沙氏琼脂培养基:见A.3。5.31%的吐温80玉米培养基:见A.4。5.4牛或马血清。5.5革兰氏染色试剂:见A.5。5.6念珠菌显色培养基:见A.6。6检验程序白色念珠菌检验程序见图1。检样25g(mL)+225mL液体沙氏培养基32.5℃±2.5℃,48h念珠菌显色培养基TTC沙氏琼脂32. 5℃±2.5℃,48 h芽管形成试验厚膜孢子形成试验结果报告图1自色念珠菌检验程序图检测步骤7.1增菌培养无菌操作取检样25g(mL),加人装有225mL液体沙氏培养基的无菌均质袋或均质瓶中。固体样2 SN/T 3970—2014品应以均质器8000r/min~10000r/min打碎或以剪刀充分剪碎,于32.5℃士2.5℃恒温培养箱内培养48h士2h,必要时延长至72h。7.2分离培养以直径3mm5mm接种环挑取增菌液一环划线接种于TTC沙氏琼脂培养基平板和白色念珠菌显色培养基平板,32.5℃士2.5℃培养48h士2h。在TTC沙氏琼脂培养基平板上,典型的白色念珠菌呈白色,表面光滑。白色念珠菌菌落在念珠菌显色培养基上特征按照显色培养基说明进行判断。7.3鉴定7.3.1革兰氏染色挑取可疑菌落涂片,进行革兰氏染色。显微镜下观察,白色念珠菌呈革兰氏阳性,细胞呈圆形或卵圆形,有时有芽生细胞。7.3.2芽管形成试验取TTC沙氏琼脂培养基平板上可疑菌落接种于0.5mL~1.0mL牛或马血清中,37℃土1℃,放置1.5h~3.0h。取上述牛或马血清一滴于载玻片上,盖上盖玻片,在显微镜下观察是否有芽管形成。典型的白色念珠菌可观察到由孢子长出的圆柱形的丝状芽管。7.3.3厚膜孢子形成试验以无菌接种环取可疑菌落划线接种于1%吐温80玉米培养基表面,并盖上无菌盖玻片,25℃培养24h~48h后,取上述培养后的盖玻片置于无菌载玻片上,在显微镜下观察是否有厚膜孢子形成。典型的白色念珠菌可观察到膨大的厚膜孢子。8结果报告8.1若可疑菌落符合7.3.1~7.3.3的要求,报告结果:白色念珠菌检出/25g(mL);8.2若可疑菌落不符合7.3.1~7.3.3的要求,报告结果:白色念珠菌未检出/25g(mL)。9废弃物处理和防止污染的措施检测过程中的废弃物,收集后进行高压灭菌或焚烧。3 SN/T 3970—2014

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