共聚焦细胞课.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第六十二页，共七十页，2022年，8月28日 共聚焦显微镜的局限 标记染料的光漂白： 为了获得足够的信噪比必须提高激光的强度；而高强度的激光会使染料在连续扫描过程中迅速褪色。 光毒作用： 在激光照射下，许多荧光染料分子会产生单态氧或自由基等细胞毒素。 限制扫描时间、激发光强度，以保持样品的活性 第六十三页，共七十页，2022年，8月28日 双光子激发原理 1931年，Maria Goppert-Mayer预言一个分子或院子可以在同一个量子过程中，同时吸收两个光子而成为激发态。 1961年，Kaiser等在CaF2:Eu2+晶体中首次观察到了这种双光子激发的过程。 NADH酶在350nm的光激发下产生450nm的荧光，而在双光子激发情形下，需同时吸收两个700nm的光子才能产生450nm的荧光。 第六十四页，共七十页，2022年，8月28日 双光子激发原理 双光子吸收几率比单光子小的多，光强的平方成正比。光强表示单位面积上的光功率，因此，具有高峰值功率和高聚焦能力的超短脉冲激光器是理想光源。 Peak power (kW) Repetition frequency (Mhz) Pulse length (fs) time 第