NYT 1457-2007饲料中氟哌酸的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1457—2007饲料中氟哌酸的测定高效液相色谱法Determination of norfloxacin in feeds-High-performance liquid chromatography2007-12-18 发布2008-03-01实施中华人民共和国农业部3发布 NY/ T 1457-2007前言本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准负责起草单位：中国农业科学院饲料研究所。本标准起草人：满晨、干小英、刘庆生、邱华勇。 NY/T 1457—2007饲料中氟酸的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中氟哌酸的测定方法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合饲料中氟哌酸含量的测定。方法检出限0. 005 g/ kg.2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699.1　饲料采样3原理在酸性条件下,饲料中的氟哌酸用乙酸和甲醇的混合溶液液液萃取，经固相萃取柱净化，HPLC 仪测定。4试剂和材料以下所用试剂，除特别注明外,均为分析纯试剂。水为符合GB/T 6682 的二级水。4.1 氟哌酸标准品:1-乙基-6-氟-1,4-二氢-7-(1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸(含量≥99%)。4.2甲醇:色谱纯。4.3乙腈：色谱纯。4.450%甲醇溶液:取 50 mL甲醇(4.2)用水稀释至 100mL。4.535%甲醇溶液:取 35mL甲醇(4.2)用水稀释至100mL。4.64%乙酸溶液:取4mL乙酸用水稀释至100mL。4.7提取液：取50mL50%甲醇溶液(4.4)与50mL4%乙酸溶液(4.6)混合。4.8碳酸钠溶液:100 g/L。4. 9 盐酸溶液:C(HCl)=0. 1 mol/ L。4.10　氢氧化钠溶液:20 g/L。4.1120%氨水:取8mL氨水用水稀释至100mL。4.12磷酸二氢钾溶液:C(KH,PO4）=100mmol/L,称取 13.6 g磷酸二氢钾,用水溶解并稀释至1000 mL,用磷酸调至 pH3～4,过0.45 um滤膜。4.13MAX洗脱液:35%甲醇溶液(4.5)用4%乙酸溶液(4.6)调至pH3～4。4.14MCX洗脱液(10%氢氧化铵甲醇溶液）:取40mL氨水用甲醇(4.2)稀释至100mL。4.15HPLC流动相：取850mL磷酸二氢钾溶液(4.12)与150mL乙腈（4.3），混合均匀。1 NY/T 1457—20074.16氟哌酸标准贮备液：称取0.0250g氟哌酸标准品，用甲醇（4.2)溶解并定容至100mL，该溶液的浓度为 250 μg/mL（2℃～8℃保存,有效期一个月）。4.17氟哌酸标准工作液：准确移取标准贮备液(4.16)2.0 mL,用甲醇(4.2)稀释并定容至25mL,该溶液的浓度为 20 μg/mL(2℃～8℃保存,有效期7d)。4.18氟哌酸标准系列溶液：移取氟哌酸标准工作液（4.17)0.2 mL，0.5 mL,1.0 mL，4.0mL，8.0 mL,10.0 mL分别用甲醇(4.2)稀释并定容至10 mL。其相应浓度分别为:0.40 μg/mL,1.00μg/mL,2.00 μg/mL,8.00 μg/mL,16.00 μg/mL,20.00 μg/mL。现配现用。5仪器设备常用的实验室仪器设备：5.1 分析天平:感量0.1mg。5.2离心机：离心力4000×g。5.3恒温水浴和氮吹仪。5.4旋涡混合器。5.5超声波清洗器。5.6带盖塑料离心管：50mL。5.7 广泛 pH试纸。5.8高效液相色谱仪。5.9阴离子交换固相萃取柱,3 mL/60 mg,30 μm。5.10阳离子交换固相萃取柱,3mL/60mg,30μm。6　试样制备按GB/T14699.1采集实验室样品约500g，粉碎，使之全部过0.28mm筛，充分混匀，贮于磨口瓶中备用。7 分析步骤7.1 提取称取适量试样(配合饲料2g～5g、浓缩饲料1g～2g、添加剂预混合饲料1g～2g),精确至0. 001g。置离心管中，加人提取液（4.7)10mL，轻摇约10s，加盖密封，旋涡混匀约10s，放气，旋涡混匀30s两次，4000r/min离心10min，上清液置于100mL容量瓶中。再分别用10mL提取液（4.7)重复提取两次,合并上清液,用碳酸钠溶液(4.8)调至pH6～7。用甲醇(4.2)稀释并定容,摇匀,