NY_T 3233-2018鸭坦布苏病毒病诊断技术.pdf

ICS 11.220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 3233—2018鸭坦布苏病毒病诊断技术Diagnostic techniques for duck Tembusu viral disease2018-09-01实施2018-05-07 发布，中华人民共和国农业农村部-发布 NY/T 3233—2018次目1前言IⅡI引言范围.2规范性引用文件缩略语S4临床诊断5病毒分离鉴定6病毒特异性抗体检测.鸭坦布苏病毒病综合判定7溶液试剂配制附录A（规范性附录）免疫荧光检测方法中所用坦布苏病毒的单抗13附录B(资料性附录)阳性对照病毒（FX2010）：14附录C(资料性附录)样品的采集、处理、运输及保存，15附录D(资料性附录）坦布苏病毒特异反转录引物、RT-PCR、荧光RT-PCR的引物和探针..．17附录E(资料性附录)18ELISA抗原和血清标准附录F(资料性附录)19鸭坦布苏病毒血凝抑制试验抗原附录G(资料性附录)20HI抗体检测的鸭血清处理方法附录H(资料性附录）21检测过程防止交叉污染的措施附录I（资料性附录）1 NY/T 3233—2018前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由农业农村部兽医局提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。本标准起草单位：中国农业科学院上海兽医研究所、北京市农林科学院畜牧兽医研究所、中国动物疫病预防控制中心、中国农业科学院兰州兽医研究所。本标准主要起草人：李泽君、杨健美、李雪松、林健、滕巧决、闫丽萍、刘玉良、王小蕾、闫大为、顾小雪、王宾宾、杨志远、朱启运、段会娟、刘立新。I NY/T 3233—2018引言自2010年春季以来，我国主要养鸭地区相继暴发一种引起鸭生长迟缓、高热、食欲不振、蛋鸭产蛋下降乃至死亡的新发传染病。研究证实，引起该病的病原为坦布苏病毒（Tembusuvirus，TMUV），属于恩塔亚病毒群（Ntaya virus group）、黄病毒属（Flavivirus genus）。该病发病率高达 100%，死亡率在5%～30%，其传播速度快、感染性强，可引起各种日龄鸭采食下降、高热和部分死亡，导致维鸭生长迟缓、蛋鸭产蛋下降或停产，对养鸭业的危害巨大。坦布苏病毒病已造成养鸭业数以亿计的经济损失，是近年来危害养鸭业最严重的疾病之一。截至目前，全国主要水禽养殖地区均已受到该病的威胁。本标准根据临床症状、细胞或鸡胚分离产生病变或死亡进行初步判断坦布苏病毒感染，后续进行病毒鉴定和血清抗体检测进行综合判定。病毒鉴定建立了3种检测方法，运用了一株特异性针对坦布苏病毒E蛋白的单克隆抗体建立了病毒的细胞免疫荧光检测方法；运用针对坦布苏病毒PrM蛋白的基因特异序列设计引物,建立了病毒的RT-PCR检测方法；运用了针对坦布苏病毒E蛋白的基因特异序列设计了引物和荧光探针，建立了病毒的荧光RT-PCR检测方法。血清抗体检测建立了2种检测方法，包括运用针对坦布苏病毒的单抗建立的ELISA抗体检测方法、运用坦布苏病毒凝集红细胞的特性建立了血凝抑制(HI)抗体检测方法。上述检测方法，可根据实际情况因地制宜地选用。本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及4个条款（5.2.1；5.2.2；5.2.3；6.1；6.2;7.2)与坦布苏病毒分离株及其单抗相关、血凝抑制试验抗原、HI抗体检测方法相关的4个专利的使用。本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场。该专利持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案，相关信息可以通过以下联系方式获得：专利持有人1：中国农业科学院上海兽医研究所；专利持有人2：北京市农林科学院。地址1：上海市闵行区紫月路518号；地址2：北京市海淀区曙光花园中路11号。请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。II NY/T 3233—2018鸭坦布苏病毒病诊断技术1范围本标准规定了鸭坦布苏病毒病诊断技术的要求。本标准所规定的临床症状和病理变化适用于鸭坦布苏病毒病的初步诊断；免疫荧光检测方法适用于坦布苏病毒分离和鉴定，反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和荧光RT-PCR检测方法用于坦布苏病毒的核酸鉴定，坦布苏病毒ELISA抗体检测方法和HI抗体检测方法适用于血清学诊断和免疫鸭群抗体水平的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求NY/T