SN_T 3429-2012天竺葵锈病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3429—2012天竺葵锈病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Puccinia pelargoni-zonalis Doidge2013-07-01实施2012-12-12发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国宁波出人境检验检疫局、中华人民共和国云南出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张建成、张慧丽、李生贵、郑炜、杜宇、陈先锋。- SN/T3429—2012天竺葵锈病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了天竺葵锈病菌（Pucciniapelargonii-zonalisDoidge）的检疫鉴定方法，以形态特征、地理分布、寄主范围为依据，明确了症状观察、显微镜检、保湿培养和病原物保存方法。本标准适用于天竺葵锈病菌相关寄主（参见附录A)的苗木、插枝等植物材料中天竺葵锈病菌的检验鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T1157进出境植物苗木检疫规程3原理3.1分类地位学名：Pucciniapelargonii-zonalisDoidge1926中文名：天竺葵锈病菌。别名：马蹄纹天竺葵柄锈菌。天竺葵锈病菌属真菌界（Fungi），担子菌门（Basidiomycota），湘子纲（Basidiomycetes），锈菌目（Uredinales），柄锈菌科（Pucciniaceae），柄锈菌属Puccinia）。地理分布和寄主参见附录A。3.2检疫鉴定依据以病菌在寄主上的症状特征、病菌形态学特征作为天竺葵锈病菌的检疫鉴定依据。4仪器设备体视显微镜、生物显微镜、高压灭菌器、人工气候箱、手持放大镜、解剖针、载玻片、盖玻片。5试剂乳酚油或80%（体积分数)乳酸。6抽样口岸查验进境天竺葵属植物时，按照SN/T1157对天竺葵属苗木进行抽样与取样。1 SN/T3429—20127检疫方法7.1现场检疫在光线充足的场所，肉眼或借助放大镜仔细检查样品叶片和叶柄有无红褐色粉状脓疱，叶片正面有无黄色圆斑，将有叶斑等症状的可疑样品挑出，进一步实验室检疫。需标注品名、数量、生产国及取样地点、取样人和取样日期等样品信息。7.2实验室检疫7.2.1保湿培养如样品植株只有可疑病状而无明显病征，则将样品置于人工气候箱中，于16℃～21℃、相对湿度≥75%、每天光照16h培养，11d～14d后观察叶片上有无病原菌孢子的形成，并进行显微镜检。7.2.2显微镜检直接挑取夏孢子堆或冬孢子堆上的孢子，置于乳酚油或80%乳酸浮载剂中，制成玻片。将玻片置于生物显微镜下，观察记录夏孢子或冬孢子的形态特征，并测量其大小。8鉴定方法8.1症状鉴定白色小斑点（约0.5mm）最初出现在叶片下表面，48h内，上表面相对的位置可见对应的黄色斑点。斑点扩大直径可达6mm～8mm。夏孢子堆通常形成于叶片下表面，两面都可见红褐色斑，初期侵染症状表现为充满粉状物的脓疱聚集在斑点中央。中期或中后期侵染症状表现为病菌在白色斑点的外围形成特征性的同心环状次生孢子堆群（参见附录B)。后期，斑点逐渐连合，中心坏死，叶片萎黄、于燥，最后脱落。托叶、叶柄和茎也可受害，表现为组织轻微隆起并产生子实体；坏死斑点逐渐延展，常造成茎的损害。8.2形态鉴定8.2.1孢子器性孢子器、锈孢子器未见。8.2.2夏孢子夏孢子堆生于叶下面，散生或聚生，圆形，裸露，直径0.2mm～1.0mm或更大，肉桂褐色，粉状；夏孢子球形或椭球形，（23μm~32μm）×（18μm~22um），壁1.5μm~2μm厚；在80%乳酸中容易看到夏孢子外壁有细密小刺，芽孔2个，腰生。参见附录C。8.2.3冬孢子冬孢子堆偶见，一般围绕夏孢子堆形成小的、有光泽的、棕褐色的非粉状脓疱，聚生在叶上或独生在茎上。冬孢子堆生于叶下面，散生或聚生，深色、突起、圆形、垫状、直径0.5μm～1.5um，常互相连合。冬孢子长椭圆形、长倒卵形或近棍棒形，（38μm～55um）×（18μm～25μm），顶部圆、钝或稍尖，基部圆形或略狭；隔膜缢缩，壁1.0μm~1.5μm厚，顶壁2μm~5um厚，光滑、棕色.每个细胞有单2 SN/T3429-2012孔，上细胞芽孔顶生，下细胞芽孔近隔膜。柄褐色或近无色，不脱落或者易折断，长达50μm。8.3天竺葵锈病菌与其近似种的主要区别天竺葵病菌与另外两种能够侵染天竺葵的柄锈菌属真菌主要区别参见附录D。9结果判定符合8.1和8.2给出的鉴定特征可判定为天竺葵锈病菌（