SN_T 1919-2016猪细小病毒病检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1919—2016代替SN/T1874—2007、SN/T1919—2007猪细小病毒病检疫技术规范Quarantine protocol for porcine parvovirus infection2017-02-01实施2016-06-28发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局刮涂屋查真伪 SN/T1919---2016前#言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1874-2007《猪细小病毒病聚合酶链反应操作规程》和SN/T1919—2007《猪细小病毒病红细胞凝集抑制试验操作规程》。本标准与SN/T1874-2007和SN/T1919—2007相比，主要技术差异如下：增加了临床诊断和病毒分离方法；-增加了酶联免疫吸附试验；一增加了胶体金试验；一增加了荧光聚合酶链式反应。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国广西出人境检验检疫局。本标准主要起草人：鱼海琼、蔡先全、程珏益、罗长保、赵吟、田纯见、盘宝进、邓艳、柏建山。本标准所代替标准历次版本发布情况为：-SN/T1874—2007;SN/T1919—2007。I SN/T 1919--2016猪细小病毒病检疫技术规范1范围本标准规定了猪细小病毒病临床诊断、病毒分离、血凝抑制试验、酶联免疫吸附试验、胶体金试验、聚合酶链式反应、荧光聚合酶链式反应的技术要求。本标准适用于猪细小病毒病的诊断、进出口检疫及流行病学调查等。2规范性引用文件下列文件对于本文件的引用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T18088出入境动物检疫采样3缩略语下列缩略语适用于本文件。PPV：猪细小病毒(PorcineParvovirus)PBS:磷酸盐缓冲溶液(Phosphate Buffer Saline)HA：血凝试验(Hemagglutination)HI：血凝抑制试验（HemagglutinationInhibition）HAU:血凝单位(Hemagglutination Unit)OD值：光密度值（OpticalDensity）ELISA：酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay)PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction)荧光-PCR：荧光聚合酶链式反应（Real-time-PCR)4 试剂4.1猪细小病毒抗原、核酸、阳性血清、阴性血清。4.2敏感细胞系：PK-15或ST细胞。4.3细胞生长液、维持液、胰酶、Hanks液。4.4青霉素、链霉素。4.5磷酸盐缓冲溶液。4.6红细胞悬液。4.7RNA酶。4.8DNA抽提试剂盒。4.9蛋白酶K。4.10Taq DNA 聚合酶。4.11100 bp DNA Marker. SN/T 1919—20164.12dNTP混合物及相应10X缓冲液5设备与材料5.1CO2培养箱。5.2 酶标仪。5.396孔V型板。5.4生物安全柜。5.5显微镜。5.6微量移液器。5.7高速冷冻离心机。5.8PCR 仪。5.9水平凝胶电泳槽。5.10电泳仪。5.11凝胶成像系统。5.12荧光定量PCR仪。6临床诊断6.1疫病概况猪细小病毒病是由PPV引起的一种猪繁殖障碍病，该病主要表现为胚胎和胎儿的感染和死亡，特别是初产母猪发生死胎、畸形胎和木乃伊胎，但母猪本身无明显的症状。其病原特征、流行病学情况参见A.1。6.22病理变化猪细小病毒病可以引起母猪子宫内膜、胎盘病理变化。感染的胎儿表现不同程度的发育障碍和生长不良，检异常变化，参见A.2。6.3与其他易混淆疾病的鉴别猪细小病毒病通常需要和猪繁殖与呼吸综合征、猪衣原体病、猪伪狂犬病感染猪群进行鉴别诊断，主要区别参见A.3。6.4丝结果判定根据该病的临床症状、病理变化和流行病学作出初步诊断，进一步确诊应根据GB/T18088采集样品进行实验室检测。7实验室检测7.1病毒分离7.1.1细胞培养用细胞瓶或细胞板培养PK-15细胞或ST细胞单层，可采用原代细胞培养或传代细胞培养，培养过程参见B.1、B.2，推荐使用传代细胞。2 SN/T 1919-20167.1.2待检病料的接种病料处理无菌采取初产母猪的流产胎儿、木乃伊胎的实质器官如心、肝、脾、肺、肾，去掉表面的筋膜，剪碎，加人Hanks液，用研钵研碎，制成1：5～1：10的悬液，加人1%青、链霉素溶液（10000U/mL），4℃过夜处理。冻融3次，2500r/min离心10min，除去细胞碎片，上清液用直径为0.22μm的一次性滤器过滤除菌，滤液置一20℃