SC_T 7016.8-2012鱼类细胞系 第8部分：斑点叉尾鮰卵巢细胞系(CCO).pdf

ICS 65.150B 50Sc中华人民共和国水产行业标准SC/T 7016.8-2012鱼类细胞系第8部分：斑点叉尾鱼回卵巢细胞系(CCO)Fish cell lines-Part 8: Channel catfish ovary cell line(CCO)2012~12-07 发布2013-03-01实施中华人民共和国农业部发布 SC/ T 7016. 8--2012前言SC/T7016《鱼类细胞系》分为下列部分：第1部分：胖头够肌肉细胞系(FHM);-第2部分：草鱼肾细胞系(CIK);第3部分：草鱼卵巢细胞系(CO);-第 4部分:虹鳟性腺细胞系(RTG-2);-第5部分：鲤上皮瘤细胞系（EPC)；~第6 部分：大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE);第7部分:棕鲷细胞系(BB);第8部分:斑点叉尾鲷卵巢细胞系(CCO);一第 9部分：蓝鳃太阳鱼细胞系(BF-2);一第10部分：狗鱼性腺细胞系(PG);-第11部分：虹鳟肝细胞系(R1);-第12部分：鲤白血球细胞系(CLC);本部分为SC/T7016的第8部分。本部分按照GB/T1.1给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口。本部分起草单位：全国水产技术推广总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人：高隆英、陈爱平、张利峰、王姝、沈锦玉、李乐。I SC/T 7016. 8--2012鱼类细胞系第8 部分：斑点叉尾卵巢细胞系(CCO)1范围本部分描述了斑点叉尾卵巢细胞系（channel catfish ovary cell line,CCO)的形态、传代培养条件、生长特性、针对部分水生动物病毒的敏感谱及传代细胞的质量控制。本部分适用于斑点叉尾卵巢细胞系的培养、使用和保藏。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义3.1斑点叉尾鲫卵巢细胞系channel catfish ovary cell line,CCOBowser P.R.和 Plumb J.A.1980 年从斑点叉尾(Parasilurus asotus）的卵巢组织细胞经原代培养、衍生的连续细胞系。4细胞的形态、大小与特性4.1 形态为上皮样细胞(参见图A.1)。4.2大小经细胞实时分析系统测定细胞悬浮后的平均直径约16.22μm，其中最大量细胞的峰值直径约13. 24 μm(参见 B. 2)。4.3特性4.3.1生长特性贴壁生长。4.3.2对部分水生动物病原的敏感性CCO 主要对斑点叉尾病毒(Channel catfish virus,CCV)敏感,接种后的 CPE形态参见图 A.2。5主要材料与仪器设备5.1 水应符合 GB/T 6682中一级水的规定。5.2细胞培养液主要成分见C.1。5.3细胞消化液主要成分及其含量见C.2。1 SC/T 7016. 8—20125. 4 血清胎牛血清。5.5仪器设备主要包括：生化培养箱、超净工作台、真空泵和废液瓶等培养细胞所用的设备；倒置显微镜；一一血球计数板或电子细胞计数仪细胞培养瓶、移液器或洗耳球以及移液管等培养细胞所用的耗材。6细胞培养条件6.1培养温度细胞置于生化培养箱内，在15℃～27℃下培养,最适生长温度为25℃。6.2 培养液 pH7.2~7.6。7 细胞传代与保藏7.1传代程序7.1.1吸弃旧培养液置于超净工作台内，无菌环境下吸弃长满单层CCO细胞培养瓶中的旧培养液。7.1.2消化细胞用细胞消化液消化分散细胞。沿细胞培养瓶一侧加人细胞消化液，一般在50mL细胞培养瓶中加人5mI左右或按细胞培养瓶培养面每平方厘米加人0.1mL～0.2mL，加人量必须完全浸没细胞层。贴壁长满的CCO消化时间一般为1.5min～3min，细胞开始呈雾状之后吸弃细胞消化液，轻轻拍打培养瓶以分散细胞。7.1.3更换细胞培养液与分瓶将消化液吸弃后，在50mL细胞培养瓶中,加入10mL～15mL细胞培养液（C.1），按每瓶5mL分成2瓶～3瓶，使细胞终浓度达到1×105个/ml。分瓶后在25℃培养,8h内细胞贴壁并生长；18h后能基本长满单层细胞。不同规格的细胞培养瓶,按培养面每平方厘米加入0.1mL～0.2mL的细胞培养液。7.1.4　细胞的传代周期细胞长满单层5d后再次传代较好。7.2细胞的保藏7.2.1保藏条件7. 2. 1. 1 温度与天数传代后的CCO经25℃24h的培养后，移入生化培养箱15℃或20℃保藏。在15℃下可保存20d以上,20℃下可保存15d～