SN 1198-2003马铃薯中转基因成分定性PCR检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1198—2003马铃薯中转基因成分定性PCR检测方法Protocol of the polymerase chain reaction for detectinggenetically modified components in potatoes2003-03-17 发布2003-09-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准马铃薯中转基因成分定性 PCR 检测方法SN/T 1198 --2003中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*字数 15 千字印张3/4开本 880×12301/162003年6月第一次印刷2003年6月第版印数 1—2 000网址 侵权必究版权专有举报电话：（010SN/T 1198—2003前言本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：高宏伟、梁成珠、张艺兵、权洁霞。本标准系首次发布的检验检疫行业标准。 SN/T 1198--2003马铃薯中转基因成分定性PCR检测方法1范围本标准规定了马铃薯中的转基因成分的定性PCR检测方法。本标准适用于转基因马铃薯品种（NEW LEAF）POTATO LINES BT-06，ATBT 04-06，ATBT 04-31, ATBT 04-36 AND SPBT 02-05; （NEW LEAF® PLUS） POTATO LINESPBMT 21-129,PBMT 21-350 AND PBMT 22-82;(NEW LEAF@Y)POTATO I.INES RBMT 15-101,SEMT15-02AND SEMT15-15等品种的转基因马铃薯块茎、植株、生薯条，生葬片、淀粉的检测。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标推。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法SN/T 1193基因检验实验室技术要求SN/T1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法SN/T1204植物及其加工产品转基因成分实时荧光PCR定性检验方法3术语、定义和缩略语下列术语和定义（缔略语)适用于本标准。3. 1转基因 transgene将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列，通过各种导人手段，使其在该物种中进行表达，以便该物种获得新的品种特征。3. 2聚合酶链式反应polymerase chain reaction,PCR模板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火而相互结合，接着在DNA聚合酶的作用下以四种脱氧核糖核酸(dNTP)为底物，使引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这一循环，使欲扩增的基因片段以几何倍数扩增。3.3缩略语3.3.1Pata：马铃薯种属特异性DNA引物，扩增的片段为马铃薯块茎贮藏蛋白 Patatin基因片段。3.3.2CaMV 35S:promoter from cauliflomer mosaic virus,花椰菜花叶病毒 35S启动子。3.3.3 NPT-I :neomycin phosphotransferase II ,新素-3-磷酸转移酶。3.3.4NOS;nopaline synthase terminator，胭脂碱含戒酶 3转录终止子。3.3.5 PVYcp:potato Y virus coat protein,马铃薯 Y病毒外壳蛋白。3.3.6 cry 3A:-个由 B. thuringiensis subsp, Tenebrionis （B, t. t.） strain BI 256-82 的蛋白。这个蛋自具有抗虫活性，尤其是可以选择性的杀死科罗拉多马铃薯甲虫（Colorado potato beetlelarvae）。 SN/T 1198—20033. 3. 7 CP4 EPSPS: 5-enolpyrulshikimate-3-phosphate synthase 5-enolpyrul shikimate-3-phosphatesynthase,来源于农杆菌 Agrobacterium sp.Strain CP4 的 5-莽草酸-3-磷酸合成酶。3.3.8PLRVr