SN_T 4283.4-2015国境口岸微孔板基因芯片检测方法 第4部分：肠道病毒及肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4283.4—2015国境口岸微孔板基因芯片检测方法第4部分：肠道病毒及肠道病毒71型柯萨奇病毒A16型Test method of microplate gene chip at frontier port-Part 4:Enterovirus,enterovirus 71 and coxsackie virus A162015-05-26发布2016-01-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4283.4—2015前言SN/T4283《国境口岸微孔板基因芯片检测方法》为系列标准，分为六个部分：第1部分：通用技术规程；-第2部分：结核分枝杆菌及katG和rpoB耐药变异基因；第3部分：7种呼吸道病毒；第4部分：肠道病毒及肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型；-第5部分：肺炎支原体、肺炎衣原体及嗜肺军团菌；第6部分：12种食源性致病菌。-本部分为SN/T4283的第4部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民共和国甘肃出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出人境检验检疫局、珠海精标仪器有限公司。本部分主要起草人：赵纯中、刘芳、黄恩炯、顾大勇、何建安、史蕾、刘春晓、赵芳、徐云庆、李永进、I SN/T4283.4—2015国境口岸微孔板基因芯片检测方法第4部分：肠道病毒及肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型1范围SN/T4283的本部分规定了国境口岸肠道病毒以及肠道病毒71型柯萨奇病毒A16型鉴别的微孔板基因芯片检测方法。本部分适用于在国境口岸实验室采用微孔板基因芯片技术对肠道病毒以及肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型的鉴别检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文，仅注日期的版本适用于本文文件。件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于GB19489实验室生物安全通用要求SN/T2752.4一2011卫生检疫人员的自我防护规范部分：实验室人员弟4第1部分：通用技术规程片检测方法SN/T4283.1国境口岸微孔板基因安全通用准则WS233微生物和生物医学实验生物3术语和定义SN/T4283.1界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1肠道病毒enterovirus又称肠病毒，属于小RNA病毒科e）的肠病毒属（Enterouirus），是一类具有相同的icormazri形态结构和生物学特点、形态最小的单股正链RNA病毒。肠道病毒包括小儿麻痹病毒（polioviruses)3个型，柯萨奇病毒（coxsackieviruses）A组23个型、B组6个型，伊科病毒（echoviruses）31个型及肠道病毒（enteroviruses)68型～72型。3.2肠道病毒71型enterovirus71肠道病毒的一种，感染性强且致病率高，可经由肠胃道（粪-口、水、食物污染）或呼吸道（飞沫、咳嗽或打喷嚏）传染，也可经由接触病人皮肤水泡的液体而受到感染。6岁以下儿童发病率最高，主要引起手足口病，与柯萨奇病毒A16型（coxsackievirusA16）导致的临床症状极为相似，很难分辨，只能依靠实验室的病毒检测技术来鉴别。3.3柯萨奇病毒A16型coxsackievirusA16肠道病毒的一种，是引起手足口病的主要肠道病毒，其导致的症状与肠道病毒71型极为相似，1 SN/T4283.4—20154缩略语SN/T4283.1界定的以及下列缩略语适用于本文件。EV：肠道病毒（enterovirus）EV71：肠道病毒71型（enterovirus71)CoxA16：柯萨奇病毒A16型（coxsackievirusA16）5生物安全防护要求5.1实验室应遵循GB19489和WS233对应的生物安全要求。5.2实验人员的防护遵循SN/T2752.4一2011的要求。6主要设备和试剂6.1主要设备：基因芯片点样仪、芯片杂交仪、芯片清洗显色仪、生物芯片全自动扫描判读仪、PCR仪、生物安全柜、离心机、移液器、恒温水浴锅等。6.2主要试剂：肠道病毒及肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型微孔板基因芯片检测试剂盒或自行设置的肠道病毒及肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型微孔板基因芯片检测试剂（相关引物及探针序列参见附录A)。7检测流程7.1样品核酸的提取使用RocheHighPureViralNucleicAcidKit提取样品中病毒RNA，具体使用方法参考试剂说明书。7.2RT-PCR扩增反应7.2.1可使用试剂盒附带的试剂