SN 1280-2003国境口岸鼠疫检验规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1280--2003国境口岸鼠疫检验规程Inspection codes for plague at frontier port2003-05-28 发布2003-12-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1280—2003目次前言1 范围2规范性引用文件e要求4准备5疑似鼠疫材料的采集、保存和运输6检验程序7结果判定附录A（规范性附录）鼠疫实验室生物安全规范附录B(资料性附录)鼠疫的 PCR 技术检测附录C（规范性附录）培养基的制备11附录D（规范性附录）疑似鼠疫材料的采取、保存和运输12 SN/T 1280-2003前言本标准的附录 A、附录 C、附录 D为规范性附录,附录 B为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国内蒙古出人境检验检疫局、中华人民共和国天津出人境检验检疫局和中华人民共和国熙龙江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：安格日格、王东胜、李月琴、孟东平、孙利。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1280—2003国境口岸鼠疫检验规程1 范围本标准规定了国境口岸鼠疫检验的实验室生物安全规范、材料的采集、保存和运输、检验程序、结果判定。本标推适用于国境口岸检验检疫工作中鼠疫的实验室检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB15991—1995鼠疫诊断标准3要求3.1鼠疫细菌检验应在专用实验室内进行。3.2检验人员应熟悉并遵守实验室管理制度、自身防护制度、技术操作规程等，见附录A。3.3凡进人强毒室操作，应两人以上同时工作。3.4及时准确做好检验的各项实验记录。3.5条件具备用聚合酶链式反应(PCR)进行口岸鼠疫的快速初步检验,参见附录 B。4 准备4.1i设备和材料天平;离心机、离心管；振荡器；温箱；显微镜；解剖盘、剪刀、短镊子；-带盖白瓷缸；接种棒、白金耳；平血;-灭菌小试管；-1 mL注射器;-血凝微量板、稀释棒;-定量滴头。4.2培养基和试剂4.2. 1鼠疫细菌检验-95%乙醇;生理盐水;-革兰氏、美蓝染液； SN/T 1280—2003溶血(0.1%)赫氏琼脂平板培养基。（培养基的制备见附录C)；龙胆紫［(1：10万）～（1：20万))亚硫酸钠(0.025%)平板或龙胆紫溶血平板培养基；鼠疫噬菌体。4.2.2 间接血凝试验(IHA)2.5%F1抗原致敏血球。-用细菌凝集效价为1：320以上的鼠疫全菌免疫血清凝集、血凝滴度应不低于1：40000；与假结核迦清交叉滴度应不高于1：5；符合上两项规定的致敏血球为合格诊断用血球，每一鼠疫季节开始前或更换致敏血球批号时应进行上述滴定。1%正常兔血清盐水。2.5%单字酸血球。4.2.2. 4 F1 抗原液(50 μg/mL～100 μg/mL)。4.2.3反向间接血凝试验(RIIIA)-2.5%鼠疫抗体致敏血球；一1%正常象清盐水：鼠疫诊断血清。5疑似鼠疫材料的采集、保存和运输详见附录 D。6检验程序6.1 鼠疫细菌检验6.1.1镜检6. 1. 1. 1 涂片.1取材腺、肝、脾、肺、心，用切面在洁净玻片上压印或涂成薄片；或取骨髓、脑脊液及各种渗出液、痰，用接种环直接涂片。至少两张，室温下自然干燥，人体及自死动物材料至少涂四张片。.2用95%乙醇或乙醇、乙醚各半配制的固定液固定10min,取出自然干燥。染色涂片进行革兰氏染色和美蓝染色。镜检发现革兰氏阴性、两极浓染、两端钝圆的短小球杆菌，为符合鼠疫菌的特点。注意腐败材料或陈旧材料荫本身形态的变化。6.1.2细菌培养执行GB15991一1995第B3章的规定。6.1.3鼠疫噬菌体裂解试验执行GB159911995第 B4章的规定。6.1.4动物接种执行GB15991-1995第B5章的规定。6.2 血清学检验6.2. 1 间接血凝试验(IHA)执行GB15991—1995第C1章的规定。6. 2.2 反向间接血凝试验(RIHA)加入10倍量的1%正常兔血清盐水，将被检材料制成1：10的悬液56℃30min灭活，离心2 SN/T 1280--20035 min取上清液被检。取小试管(15mm×100mm)两列,第一列第一管加人1%正常兔血清盐水0.9mL，其余各管各加0.5mL，为血凝抑制列，第二列的各管加人0.25mL，为血球凝集列，见表1。表 1试管法反向血凝试验操作(二排试验)稀释度试验材料1: 201:401 : 801:1601 + 6401