蔬菜水果中克百威的检测 量子点微球荧光免疫层析法.docxVIP

蔬菜水果中克百威的检测 量子点微球荧光免疫层析法 范围 本文件规定了蔬菜水果中克百威的量子点微球荧光免疫层析快速检测方法。 本文件适用于辣椒、青菜、豇豆、芹菜、韭菜、黄瓜、苹果、柑橘和梨中克百威的快速检测。 本方法检测克百威的检出限为0.0035 mg/kg，定量限为0.0085 mg/kg。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27417 合格评定 化学分析方法确认和验证指南 NY/T 788-2018 农作物中农药残留试验准则 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 原理 本方法以量子点微球为荧光标记物，基于竞争抑制免疫层析技术原理，通过荧光信号读取仪进行数据读取和分析，根据已设定的标准曲线计算样品中待测物质的含量，对蔬菜水果中的克百威进行半定量或定量检测。 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯 水：应符合 GB/T 6682，二级水。 克百威标准物质：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 乙腈（C2H3N）。 磷酸氢二钾（K2HPO4）。 磷酸二氢钾（KH2PO4）。 样品提取液配置：准确称取5.6 g磷酸氢二钾（5.4）、0.41 g磷酸二氢钾（5.5），乙腈（5.3）100 mL用水溶解并定容至1 L。 样本净化管：不同厂家材料可能不一致，本方法不做规定，目的为样本基质净化。 样品稀释液配置（0.01 mol/L磷酸盐缓冲液）：准确称取5.6 g磷酸氢二钾（5.4）、0.41 g磷酸二氢钾（5.5），用水溶解并定容至1 L 克百威标准品储存液（100 mg/L）：准确称取克百威标准物质（5.2）10 mg（精确至0.01 mg），置于100 mL容量瓶中，用乙腈（5.3）溶解并定容至刻度，摇匀后-20 °C冷冻避光保存，有效期6个月。 仪器和设备 分析天平：感量分别为0.01 g和0.01 mg。 微量移液器：20～200 μL、100～1000 μL和1～10 mL。 旋涡混合器：转速≥2500 r/min。 恒温孵育器：设定温度误差不超过±1度。 荧光免疫分析仪：激发波长为365±5 nm，发射波长为610±5 nm。 离心机：转速≥4000 r/min。 搅碎机：转速≥5000 r/min。 离心管：1.5 mL和50 mL。 克百威量子点微球荧光免疫层析快速检测卡（含ID卡，内设对应批次标准曲线）。 试样制备 分样和粉碎 取不少于100 g具有代表性的蔬菜水果样品，充分均质混匀，分别装入洁净容器作为试样和留样，密封，标记，留样置于-20 °C避光保存。蔬菜水果取样部位参考NY/T 788-2018《农作物中农药残留试验准则》。 试样前处理 准确称取 2 g ± 0.1 g样本于50 mL离心管中。 向上述离心管中依次加入样本提取剂3 mL（5.6），盖上盖子漩涡混匀2 min。 取1 mL提取后上清液到一支样本净化管（5.7）中，在漩涡振荡器上震荡混匀1min，4000 rpm离心2min。 取50 μL离心后上清液加入700 μL克百威样本稀释液（5.8），混匀后用于检测。 注：不同厂家检测卡所用的样品前处理方法可能不同，应按照产品使用说明中规定方法进行操作。 检测步骤 测试前打开荧光免疫分析仪（6.5），确认试剂盒中的ID卡与试剂盒的批号是否匹配后插入ID卡，在仪器测试界面点击“读ID卡/读项目”，界面出现“读取完成”，点击“确认”即可使用。 将恒温孵育器（6.4）开机，待温度升至37℃即可使用。 从包装铝箔袋中取出检测卡，在半小时内使用。 将检测卡平放，用微量移液器吸取90 μL稀释后的待测液于检测卡的加样孔（S）中，在恒温孵育器中37℃孵育反应10 min。 反应时间结束后立即将检测卡插入读取仪中，点击仪器界面的“测试”，仪器会自动给出定量测试结果，15 min后测试无效。 注：不同厂家读卡仪所用仪器界面设置可能不同，应按照仪器使用说明中规定方法进行。 9结果表述 样品中克百威的含量由荧光分析仪自动计算并显示，单位为毫克/千克（mg/kg）。 10 其他 本方法参比标准为GB23200.112《食品安全国家标准 植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留量的测定 液相色谱-柱后衍生法》。 注： 性能指标计算方法见附录A。 附 录 A （资料性） 产品性能指标计算 A.1检出限和定量限 通过对20个独立的空白样品进行测定，检出限以空白样品20次测定结果的均值加3倍标准偏差计算；定量限以空白样品20