SN_T 2706-2010鱼淋巴囊肿病检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2706—2010鱼淋巴囊肿病检疫技术规范Quarantine protocol for lymphocystis disease2010-11-01发布2011-05-01实施中华人民共和国0发布国家质量监督检验检疫总局码防货 SN/T 2706—2010前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：邱杨、刘建丽、赵丽。 SN/T 2706—2010鱼淋巴囊肿病检疫技术规范范围本标准规定了在临床症状的基础上，用显微镜检测鱼淋巴囊肿病的方法。本标准适用于鱼淋巴囊肿病的检疫。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适角于本文件。GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法3缩略语下列缩略语适用于本文件LCDV(lymphocystis disease）:淋巴囊肿病毒4试剂和材料4.1 水:符合 GB/T 6682 中级永的规格。4.2Davidson 氏固定液（见附泰 A.1）。4.3苏木精染色剂。4.4伊红染色剂。5器材和设备5.1切片机。5.2显微镜。6鱼淋巴囊肿病临床诊断和显微镜检查6.1临床症状鱼淋巴囊肿病是一种鱼的体表病(参见附录B),病鱼体表皮肤、鳍、鳃和口部出现多个大小不等的囊肿（参见图C.1），以背鳍、腹鳍基部最为严重，似珍珠样，单在或成群。病变部位呈灰白色或灰黄色，有时带有出血而呈淡红色，并常融合而成桑葚样。囊肿的质地柔软，肉眼可见囊肿内有许多的小颗粒。体表、鳃、颌部及肛门等多处有出血点，检有时可见在鳃丝、咽部有肿胀物,有的肝脏切口边缘外翻，提示肝肿大。6.2显微镜检查取体表囊肿组织，用 Davidson 氏固定液进行固定。固定好的组织块用水充分洗涤，按下列程序处1 SN/T 2706—2010理制作组织切片，依次浸人如下试剂：70%乙醇60 min，85%乙醇60 min，95%乙醇60min，无水乙醇I30 min,无水乙醇Ⅱ30 min，二甲苯＋无水乙醇（体积比 1：1)30 min，二甲苯 I 30 min，二甲苯Ⅱ30 min，二甲苯十石蜡（体积比1：1)15 min,石蜡 I15 min,石蜡Ⅱ15 min(根据组织块大小和种类，各步时间作适当调整）。石蜡包埋后，进行切片。切片厚度不超过6μm。经苏木精-伊红染色（见附录A.2)后，进行光学显微镜观察。发现原先肉眼可见囊肿内的许多小颗粒镜下为巨大细胞（参见图 C.2)，直径可达100 μm～500 μm,体积是正常细胞的数万倍,有很厚的细胞膜。细胞核偏离中心位置。细胞质内散布有大量大小不一的网状的包涵体。这种包涵体呈楔状、块状，或数个成链圈状排列，且大多集中在细胞的边缘部分。7鱼淋巴囊肿病综合判定由于该病有其特异性的临床症状,有囊肿判为可疑。然后通过组织切片观察巨大细胞来确诊。通常不需要其他的检测手段，很容易和其他体表疾病区别开来,如：痘疮病和水霉病等。患痘疮病的鱼体表出现粘稠的石蜡状的白色增生物,即痘疮,痘疮里不含网状包涵体的巨大细胞。而患水霉病的鱼其体表覆盖的丝状或絮状物，镜检是能观察到霉菌丝。 SN/T 2706-—2010附录A(规范性附录)试剂配制及染色方法A.1Davidson 氏固定液配制37%甲醛220 mL95%乙醇330 mL冰乙酸115 mL蒸馏水335 mLA.2苏木精-伊红染色方法A.2.1配制苏木精1g氧化汞0.5g乙醇10 mL20 g硫酸铝钾(或硫酸铝铵)去离子水200 mL在酒精内溶解苏木精，在水内溶解硫酸铝钾，加热助溶。混合苏木精和硫酸铝钾溶液，尽快煮沸。加人氧化汞，此时溶液变成深紫色。在自来水中迅速冷却，滤纸过滤，装入瓶中盖紧，室温保存。A.2.2染色A.2.2.1脱蜡：依次浸人如下试剂：二甲苯 5 min，二甲苯十无水乙醇（体积比1：1)5 min,100%乙醇2 min,95%乙醇1 min,80%乙醇1 min,75%乙醇1 min,蒸馏水洗 2 min。A.2.2.2用苏木精染色10 min。A.2.2.3在稀释的氨水中分化，直至呈蓝色（约10 min）。A.2.2.4　用 0.5%伊红复染 2 s～5 s。A.2.2.5脱水:依次浸人如下试剂:95%乙醇（I）1 min,95%乙醇（Ⅱ）1 min,100%乙醇（I)1 min，100%乙醇(I)1 min。A.2.2.6透明:依次浸人如下试剂:二甲苯石碳酸(3：1)1 min，二甲苯 1 min,二甲苯十无水乙醇（体积比 1:1)1 minA.2.2.7 中性树胶封片