SN 1572-2005进出口粮谷、饲料中伏马毒素检验方法 液相色谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1572—2005进出口粮谷、饲料中伏马毒素检验方法液相色谱法Inspection of fumonisins in cereals and feedstuffs for import and export--Liquid chromatographic method2005-05-20 发布2005-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1572--2005前言本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国吉林出人境检验检疫局。本标准主要起草人：林维宣、田苗、牟俊、赵彤彤、郭兰、商明磊、曹冬梅。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 1572—2005进出口粮谷、饲料中伏马毒素检验方法液相色谱法1范围本标准规定了进出口粮谷、饲料中伏马毒素 BI、B²检验的抽样、制样和液相色谱检测方法。本标准适用于进出口玉米和玉米饲料中伏马毒素 B1、B² 的检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过在本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，使用本标准的各方应研究使用下列标准最新版本的可能性。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。SN/T0800.1—1999进出口粮油、饲料检验　抽样和制样方法3抽样和制样按SN/T0800.1执行。在抽样和制样过程中，必须防止样品受到污染或发生伏马毒素含量的变化。4　测定方法4.1方法提要样品用甲醇十水提取，经FumoniTest 免疫亲和柱或 SAX强阴离子固相萃取柱净化，经衍生化，用反相液相色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量。4.2试剂和材料4.2.1水：超纯水。4.2.2甲醇：色谱纯。4.2.3乙腈：色谱纯。4.2.4乙酸：优级纯。4.2.5磷酸：优级纯。4.2.6盐酸：优级纯。4.2.7磷酸二氢钠分析纯。4.2.8磷酸氢二钠：分析纯。4.2.9磷酸二氢钾：分析纯。4.2.10氯化钠：分析纯。4.2.11氯化钾：分析纯。4.2.12氢氧化钠：分析纯。4.2.13四硼酸钠：优级纯。4.2.14巯基乙醇：优级纯。4.2. 15邻苯二甲醛：优级纯。4.2.16甲醇＋水(1＋1)。4.2. 17甲醇十水(3十1)。 SN/T 1572--20054.2.18甲醇+水(4+1)。4.2.19乙酸+甲醇(1＋99)。4.2.20伏马毒素标准储备液：称取伏马毒素B、Bz各10.0mg，分别用乙睛十水（1十1)溶解并定容到100mL容量瓶中，伏马毒素 B、Bz的浓度均为100 μg/mL。4.2.21混合标准储备液：取标准储备液B1、B²以1：1比例混合，得混合标准储备液，伏马毒素B1、Bz的浓度均为50μg/mL。4.2.22混合标准工作液：取适量混合标准储备液于10mL容量瓶中，用乙腈十水（1十1）定容，得伏马毒素B、Bz的浓度分别为0.2μg/mL、1.0 μg/mL、5μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL 的混合标准工作液（伏马毒素标准储备液和工作液在4℃下可贮存6个月）。4.2.23磷酸盐缓冲溶液:称取磷酸氢二钠1.2 g,磷酸二氢钾0.2 g,氯化钠8 g,氯化钾0.2 g,溶解于990 mL水中,用盐酸调节 pH为 7.0,用水定容到1 L。4.2.24衍生剂：称取5mg邻苯二甲醛，溶于1mL甲醇，用0.05mol/L四硼酸钠溶液定容到50mL,加入25 μL巯基乙醇,混勾，备用(0℃～4℃可保存一周）。4.2.25液相色谱流动相：甲醇+磷酸二氢钠（0.1mol/L)（77+23），用磷酸调节pH为3.3μm、0.45 μm滤膜过滤。4.2.26 FumoniTest 免疫亲和柱。4.2.27SAX强阴离子固相萃取(SPE)柱：500 mg/10 mL,Varian 产品。4.2.28玻璃纤维滤纸。4.2.29离心管:50 mL。4.2.30滤膜:0.45 μm。4.3仪器和设备4.3.1高效液相色谱仪：配有荧光检测器。4.3.2泵流控制台。4.3.3固相萃取仪。4.3.4组织均质器：20 000 r/min。4.3.5涡旋均匀器。4.4测定步骤4.4.1提取和净化免疫亲和柱净化法提取：样品经粉碎并通过40目筛子。称取25.0g于均质杯中，加人4g氯化钠和50ml甲醇十水（4.2.18），高速均质3min，静置10min。将提取液上清液用槽纹滤纸过滤，收集滤液。净化：推确移取上述滤液10.0mL于100mL具塞锥形瓶中，加40mL磷酸盐缓冲溶液（4.2.23），置于涡旋均勾器上混匀，经玻璃纤维滤纸过滤，收集滤液备用。