SNT 2497.14-2010进出口危险化学品安全试验方法 第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2497.14—2010进出口危险化学品安全试验方法第 14 部分:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验Test method of import and export dangerous chemicals-Part 14 : Determination of sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electropheresis2010-03-02发布2010-09-16 实施中华人民共和国发布查边真国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2497.14—2010前言SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分：第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验；第 2部分：空斑形成细胞(PFC)试验；第3部分：大型遥繁殖试验；第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；第 5部分：睾丸细胞(UDS)试验;第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；第7部分：小鼠耳肿胀试验；第8部分：窝淋巴结试验；第 9部分：血清溶血素测定试验;第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验；第11部分：种系突变试验；第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验；第13部分：荧光原位杂交试验；第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；第15部分：PCR-SSCP实验；第16部分：Western-Blot实验；第17部分：哺乳动物行为毒理学试验；第18部分：DNA加合物的检测方法；-第19部分：Northern Blot实验；第20部分：Bradford法测定蛋白质含量；第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验；第22部分:DNA的Tm值测定方法；第23部分：细胞器的分离实验方法；-第24部分：细胞免疫功能体外检测方法；-第25部分：体液免疫功能试验；-第26部分：巨噬细胞功能试验；第27部分：流式细胞术检测凋亡；第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；第29部分：生化需氧量(BOD)测定。本部分为SN/T 2497系列标准的第14部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出人境检验检疫局。本部分主要起草人：张园、王利兵、赵琢、王华、李学洋、徐斌。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2497.14—2010进出口危险化学品安全试验方法第 14 部分:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验1范围SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验的主要试剂、试验步骤和试验结果。本部分适用于进出口危险化学品 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验。2原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electropheresis）,在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠(SDS)，蛋白质样品就会与SDS结合形成带负电荷的复合物，由于蛋白质的相对分子质量不同，所形成复合物的相对分子质量也不同，在电泳中反映出不同的迁移率。根据标准蛋白质样品在电泳中的迁移率和相对分子质量所作出的标准曲线就可以推算出蛋白质样品相对分子质量的近似值。3 主要试剂3.130%丙烯酰胺取丙烯酰胺 29 g和 1 g N,N²-亚甲双丙烯酰胺溶于 60 mL水中,加热至 37℃溶解,补加水至终体积为100 mL，过滤除菌,避光，4℃保存。3.21 mol/L Tris 溶液(pH6.8)称取 12.1 g Tris 碱加水至接近 100 mL,用 0.1 mol/L 的 HCl 调 pH 值至 6.8,补水至 100 mL,4℃保存。3.31.5 mol/L Tris 溶液(pH8.8)称取 18.2 g Tris 加水至接近 100 mL,用 0.1 mol/L的 HCl 调 pH 值至 8.8,补水至 100 mL,4 ℃保存。3.410%过硫酸铵贮存液用去离子水配制小量10%的贮存液保存于 4℃,1周内使用。3.55×甘氨酸电泳缓冲液15.1g Tris 碱,94g甘氨酸,再加 50 mL 10%的 SDS,补水至1000mL,室温保存。3.61× SDS凝胶加样缓冲液50 mmol/L Tris·Cl(pH6.8),100 mmol/L 二硫苏糖醇(DTT),2%SDS(电泳级),0.1%溴酚蓝，10%甘油,DTT临用时现加。3.7 染色液先将0.25g考马斯亮蓝R-250溶于90mL甲醇水溶液（体积比为1：1)和10mL冰乙酸的混合液中,过滤。3.8脱色液90 mL甲醇与水（体积比为1：1)和10 mL冰乙酸的混合液。1 SN/T 2497.14—20104 试验步骤变性4.1