SN_T 4877.14-2019基因条形码筛查方法 第14部分：检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒.pdf

ICS 65.020.01B 16SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4877.14—2019基因条形码筛查方法第14部分：检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒DNA barcoding screening method--Part 14 : Qurantine Sobemoviruses2019-09-03 发布2020-03-01实施江中国按商出版社有限公司HG944440011790中华人民共和国海关总署发布活网刮开涂层 激活密码 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准基因条形码筛查方法第14部分：检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒SN/T 4877.14-2019*中国海关出版社有限公司出版发行北京市朝阳区东四环南路甲1号（100023)编辑部：（0107509网址 /book中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*印张 0.75　字数22千字开本880×12301/162020年3月第次印刷2020年3月第一版印数 1~—500*书号：155175·189 SN/T 4877.14—2019前言SN/T4877《基因条形码筛查方法》分为15个部分：第1部分：检疫性棒形杆菌；第2部分：检疫性黄单胞菌;第3部分：检疫性植原体；第4部分：检疫性茎点霉；第5部分：检疫性拟茎点霉；-第6部分：检疫性嗜酸菌；第7部分：检疫性轮枝菌；第8部分：检疫性炭疽菌；第9部分：检疫性腥黑粉菌;第10部分：检疫性疫霉；第11部分：检疫性异株苋亚属；第12部分：黄瓜绿斑驳花叶病毒；第13部分：检疫性马铃薯Y病毒属病毒;第14部分：检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒；第15部分：检疫性叶点霉。本部分为SN/T4877的第14部分。本部分按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由中华人民共和国海关总署提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国北京海关、中华人民共和国厦门海关。本部分主要起草人：邓丛良、陈红运、赵晓丽、吕玉峰、骆卫峰、刘兴亮、郑春生。1 SN/T 4877.14—2019基因条形码筛查方法第14部分：检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒1范围SN/T 4877 的本部分规定了检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒的基因条形码筛查方法中 RNA 提取、基因扩增、序列的比对分析及结果判定等。本部分适用于植物繁殖材料及植物产品中检疫性南方菜豆花叶病毒属病毒的筛查检测。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T3436藜草花叶病毒检疫鉴定方法SN/T 3438南方菜豆花叶病毒检疫鉴定方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1DNA条形码DNA barcode生物体内能够代表该物种的,标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA 片段。4南方菜豆花叶病毒属基本信息中文名：南方菜豆花叶病毒属学名:genus Sobemovirus该属病毒可侵染单子叶植物和双子叶植物，但每个病毒的自然寄主范围相对窄,病害症状主要是花叶和斑驳。该属有 13个种和 3个暂定种，该属病毒包括南方菜豆花叶病毒（Southern bean mosaicvirus，SBMV)和藜草花叶病毒（Sovebane mosaic virus，SoMV)2 种检疫性植物病毒。有关该病毒属的其他信息参见附录 A。5　方法原理南方菜豆花叶病毒属的成员为正义单链 RNA病毒。病毒复制酶基因的保守区域即为该属的条形码特征序列，根据此保守区域设计简并引物，进行RT-PCR扩增和PCR产物测序，实现对南方菜豆花叶病毒属病毒的筛查检测。1 SN/T 4877.14—20196仪器和试剂6.1仪器与设施酶联检测仪、电子天平（感量0.0001g）、定性PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、恒温水浴、低温冰箱、普通冰箱、离心机等，微量移液器（2.5μL、10μL、20μL、100μL、200 μL、1000μL），酶联板、研钵等,隔离温室。6.2 试剂见附录 B。7制样挑取畸形、不成熟的种子播于灭菌土中，待长出 3片～4片真叶后将表现症状的植株编号，未表现症状的植株分组(10 株为1组)并编号。8DNA 条形码筛查分别提取样品和对照的总RNA，反转录合成cDNA后，进行PCR扩增。健康的植物组织作阴性对照，感染SBMV的植物组织作阳性对照，用无菌水作空白对照。具体操作见附录B。9结果判定9.1通用 RT-PCR方法检测结果为阴性，则判定未检出南方菜豆花叶病毒属病毒。9.2通用 RT-PCR方法检测结果为阳性，则进行序列测定与分析：a）如果翻译后氨基酸序列与南方菜豆花叶病毒属已知病毒