SN_T 2868-2011西尼罗病毒病检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2868—2011西尼罗病毒病检疫技术规范Quarantine protocol for west nile fever2011-12-01实施2011-05-31 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局0 SN/T 2868—2011前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准参考了国际动物卫生组织(OIE)的《诊断试验和疫苗标准手册》（2008 版）（Manual of Diagnostic Test and Vaccines for Terrestrial Animals)2. 1.20 章和有关行业标准、文献制定,补充了 RT-PCR和实时荧光 RT-PCR 的检测方法。本标准由国家认证认可监督委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国云南出人境检验检疫局本标准主要起草人：邱璐、李健、姜焱、熊炜、周晓黎、蒋静、胡永强。 SN/T 2868—2011西尼罗病毒病检疫技术规范1范围本标准规定了西尼罗病毒病临床诊断和实验室诊断。本标准适用于西尼罗病毒病病原及抗体的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3 临床诊断3. 1 发病症状人和马感染后，多数不出现症状，部分感染者发生伴有类似流感症状的西尼罗热，少量严重的病例出现高热、剧烈头痛、颈项强直、昏迷、抽搐等中枢神经系统体症，发生西尼罗脑炎，甚至死亡。3. 2° 流行病学西尼罗病毒（west nile virus,WNV)为单链 RNA 病毒，属黄病毒科黄病毒属。病毒呈球形,基因组编码三种结构蛋白(C、prM和 E蛋白)与七种非结构蛋白。西尼罗病毒在抗原性上与同属黄病毒的日本乙型脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、Kunjin病毒、登革病毒相似,在血清学检测时，易产生交叉反应。西尼罗病毒于1937年首次分离，经蚊媒传播可引起人类或动物的西尼罗热及西尼罗脑炎。鸟类、马、人等哺乳动物都是易感动物。其中鸟类是主要的储存宿主。该病在20世纪50年代～90年代都曾有过流行，特别是20世纪90年代以后，流行区呈扩大趋势，范围遍及非洲、欧洲、中东、西亚、中亚、大洋洲和北美洲等广大地区。目前我国尚无该病流行的报道，但随着全球气候变暖，疫源地旅行传播以及生物媒介等潜在因素的存在，为西尼罗病毒的传播提供了可能。加之该病毒目前在我国周边国家如印度、俄罗斯南部、东南亚等国已有报道，我国人群普遍缺乏对该病毒的免疫力，一旦传人，将导致严重的公共卫生灾难。4 实验室诊断4. 1 西尼罗病毒 RT-PCR、实时荧光 RT-PCR 检测及套式 PCR 检测4.1.1　方法介绍可以进行西尼罗病毒核酸检测。本标准提供的三种核酸检测方法可以根据具体情况选择采用。PCR试验的前处理操作可以在BSL-2实验室进行。在对人、活动物或户体进行取样时，采样人员应佩戴个人防护设施，穿戴防护衣，佩戴防护口罩、面罩、手套。1 SN/T 2868—20114.1.2设备、材料和试剂设备、材料4. 1.2. 1. 1 PCR 仪。4. 1.2. 1.2实时荧光 PCR检测仪。4. 1.2. 1.3 电泳仪。4. 1.2. 1. 4凝胶成像分析系统。4. 1.2. 1. 5高速台式冷冻离心机。4. 1.2. 1. 6普通台式离心机。4. 1.2. 1.7匀浆器。4. 1.2. 1. 8微量可调移液器。4. 1. 2. 1. 9无RNase 的离心管、吸头和无RNase 的玻璃容器。4. 1.2.2 试剂除特别说明以外，本标准所用试剂均为分析电，所有试剂均用无RNase污染的容器（用DEPC水处理后高压灭菌)分装。试验用水应符合 GB7T 6682规庭。4. 1. 2. 2. 1裂解液：Trizol 或其他。4. 1. 2. 2. 2异丙醇。4. 1. 2.2.3Taq DNA 酶。4. 1. 2. 2. 475%乙醇：用新开启的无水乙醇和DEPC水配制，=20℃预冷。4. dNTP:含 dATP、dTTP、dCTP、dGTP各mmot/l4. 1.2.2. 6逆转录酶。4. 1. 2.2.7DEPC水：用DEPC处理后的水！4. 1. 2. 2.850×TAE缓冲液。4.1.3采样、送检和处理人员样本采集4. 1.3. 1. 1采集来自于疫区的人员、人境可疑人员、申请检验人员的血液。.2采集怀疑死于西尼罗病人员的血液、脑髓液、组织样品，特别是脑组织和神经组织样品。动物及产品样本采集.1采集来自疫区的活动物的血清。.2采