SN_T 3691-2013转基因玉米PCR-DHPLC检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3691—2013转基因玉米PCR-DHPLC检测方法PCR-DHPLC method for detection of genetically modified corn2014-03-01实施2013-08-30 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局套真行 SN/T 3691—2013前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中国检验检疫科学研究院、国家纳米科学中心、深圳博睿祥晖生物技术有限公司、辽宁农业科学研究院，本标准主要起草人：凌杏园、章桂明、朱水芳、潘广、向才玉、程颖慧、龙海、黄新、汪朝晖、朱劲松、欧阳辉、缪建锟。1 SN/T 3691—2013转基因玉米 PCR-DHPLC 检测方法1范围本标准规定了产品中转基因玉米成分的 PCR-DHPLC检测方法。本标准适用于产品中转基因玉米品系59122、Bt11、Bt176、CBH351、EV3272、GA21、MIR604、MON810、MON863、MON88017、MON89034、NK603、T25 和 TC1507 的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.2转基因产品检测~实验室技术要求GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法SN/T 1193基因检验实验室技术要求3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文变性高效液相色谱技术(Dehaaturing High/perforormance Liquid Chromatography, DHPLC)一种应用离子对反相液相色谱原理对DNA片段进行分离的简单、快速、非凝胶的核酸分析方法。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。BAR:磷化麦黄酮乙酰转移酶基因(phosphinothricin acetyltransferase gene)bp:碱基对(base pair)CaMV35S:花椰菜花叶病毒 35S启动子(35S promoter from cauliflower mosaic virus)Ct值：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数(C:Cycle,t：threshold)CTAB：十六烷基三甲基溴化铵(（cetyltrithylammonium bromide)dATP:脱氧腺苷三磷酸(deoxyadenosine triphosphate)dCTP:脱氧胞苷三磷酸（deoxycytidine triphosphate)dGTP:脱氧鸟苷三磷酸(deoxyguanosine triphosphate)DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid)dNTP:脱氧核苷三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)dTTP:脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidine triphosphate)dUTP:脱氧尿苷三磷酸（deoxyuridine triphosphate)EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)FMV35S:玄参花叶病毒 35S启动子(35S promoter from Figwort Mosaic Virus)1 SN/T 3691—2013NOS:胭脂碱合酶基因终止子(terminator of nopaline synthase gene)NPTIⅡ：新霉素-3-磷酸转移酶基因（neomycin-3-phosphotransferase gene)PAT:草丁麟乙酰转移酶基因(phosphinothricin acetyltransferase gene)PCR:(polymerase chain reaction)简称 PCRTEAA:三乙基铵醋酸盐Taq:水生栖热菌(Thermus aquaticu)TE:Tris-HC1、EDTA 缓冲液TM:熔解温度(melting temperature)Tris:三(羟甲基)氨基甲烷[tris(hydroxymethyl)aminomethane]UNG酶：尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG)酶(uracil-N-glycosylase)Zein:玉米醇溶蛋白基因4　方法提要采用普通PCR方法对样品中转基因玉米成分的各检测位点进行扩增，扩增产物通过DHPLC(变性高效液相色谱技术 Denaturing High-perfor