SN 1571-2005进出口粮谷中呕吐毒素检验方法 液相色谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1571—2005进出口粮谷中呕吐毒素检验方法液相色谱法Inspection of deoxynivalenol in cereals for import and export-Liquid chromatographic method2005-05-20 发布2005-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局“数码防伪” SN/T 1571—2005前 言本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局。本标准主要起草人：林维宣、田苗、康庆贺、王玫、曹冬梅。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1571---2005进出口粮谷中呕吐毒素检验方法液相色谱法1范围本标准规定了进出口粮谷中呕吐毒素检验的抽样、制样和液相色谱检测方法。本标准适用于进出口小麦和玉米中呕吐毒素的检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过在本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，使用本标准的各方应研究使用下列标准最新版本的可能性。SN/T0799—1999进出口粮油、饲料检验检验一般规则SN/T0800.1--1999进出口粮油、饲料检验抽样和制样方法3抽样和制样按SN/T0800.1执行。在抽样和制样过程中，应防止样品受到污染或发生呕吐毒素含量的变化。4测定方法4.1方法提要样品以水或乙睛+水提取，提取液经DONtest HPLC免疫亲和柱或固相萃取（SPE)柱净化，反相液相色谱柱分离，紫外检测器220nm波长下检测，外标法定量。4.2试剂和材料4.2.1水；超纯水。4.2.2甲醇：色谱纯。4.2.3乙：色谱纯。4.2.4乙+水(84+16)。4.2.5呕吐毒素标准储备液：称取呕吐毒素10.0mg，用甲醇溶解并定容到100mL容量瓶中，浓度为100μg/mL（呕吐毒素标准储备液在一20℃冷冻条件下可以贮存4个月）。4.2.6呕吐毒素标准中间储备液：取标准储备液1.0mL于10mL容量瓶中，用流动相定容，浓度为10.0 μg/mL.4.2.7呕吐毒素标准工作液；用上述标准中间液，根据需要配制成适用浓度的标准工作液。所有标准工作液均需在冷藏条件下贮存（每周配制）。4.2.8液相色谱流动相：甲醇+水（20+80），0.45μm滤膜过滤。4.2.9 DONtest HPLC 免疫亲和柱。4.2.10 固相萃取(SPE)柱:MycoSep No.225。4.2.11聚丙烯塑料管：15mm(内径）×85mm，与固相萃取柱（MycoSepNo.225)配套使用。4.2.12微纤维滤纸：1.5 μm,直径11 cm。4. 2. 13聚乙二醇 8 000。4.2.14离心管:10 mL。1 SN/T 1571—20054.2.1510mL玻璃注射器。4.2.16 滤膜:0.45 μm。4.3仪器和设备4.3.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器。4.3.2泵流控制台。4.3.3固相萃取仪。4.3.4组织均质器：20000r/min。4.3.5涡旋均匀器。4.4测定步骤4.4.1提取和净化免疫亲和柱净化法提取：样品经粉碎并通过 40目筛子。称取25.0g于均质杯中，加人5g聚乙二醇 8000mL和100mL纯水，盖上均质杯的盖子，高速均质2min。静置10 min，将提取液经槽纹滤纸过滤，收集滤液。取20mL滤液通过微纤维滤纸过滤到50mL量杯中。净化：将DONtest亲和柱（4.2.9)的盖帽取下，剪掉帽盖的封口端，再把帽盖盖上。将10mL玻璃注射器简(4.2.15)与亲和柱相连。准确移取上步滤液2.0 mL于玻璃注射器简中,接上泵流控制器，拔掉亲和柱底帽。控制压力使样液以1滴/s的流速全部通过亲和柱，直至空气进人到亲和柱中，弃去全部流出液。加10mL纯水以2滴/s的流速淋洗亲和柱，弃去全部流出液。准确加人1.0mL甲醇于玻璃注射器针筒中，以1滴/s的流速洗脱，收集全部洗脱液于10mL玻璃管中，氮气吹干，残留物加200μL甲醇十水（4.2.8)溶解，混勾，过滤膜（4.2.16），进样分析。固相萃取(SPE)柱净化法提取：样品经粉碎并通过40目筛子。称取25.0g于均质杯中，加人100mL乙腈十水（4.2.4)，高速均质 3min。静置10 min，将提取液经滤纸过滤，收集滤液。净化：移取8mL提取液于聚丙烯塑料管（4.2.11)中，一手持净化柱，一手持含提取液的塑料管，把净化柱橡胶法兰一端垂直缓缓推人聚丙烯塑料管中（进行此步操作时不要用手指盖住净化柱上部开口），净化的提取液进人净化柱上部管内。收集约4m