免疫组化技术常见问题及处理方法.pptVIP

热抗原修复 更有效：染色结果更一致，操作更单一 事先确定的热修复时间可适用于几乎所有的组织 一抗可以进一步稀释（节省费用） 有些抗体只有采用热抗原修复才有效 当前第31页\共有60页\编于星期三\20点 高压锅热抗原修复 比微波更有效 能处理大批量的切片 达到更高的温度 加热均匀（不像微波炉有热点和冷点）和节省时间 当前第32页\共有60页\编于星期三\20点 高压锅热抗原修复 将高压锅中的缓冲液煮开（不加盖） 将切片放入沸腾的缓冲液 盖紧盖子和高压阀，加热至全压力 达到全压力后才能计时，最佳时间由各个实验室自行确定----通常在2-4分钟 当前第33页\共有60页\编于星期三\20点 热抗原修复：注意事项 无论哪一步都不要让切片干涸（抗原可完全丢失） 加热后需要冷却15～30分钟（个别未折叠的蛋白链恢复到原来的构型） 当前第34页\共有60页\编于星期三\20点 热抗原修复存在的问题 过度的热修复会导致组织形态的破坏或组织完全消化，免疫染色变弱或定位不准确 有一个时间点，超过这个时间点进一步热修复也不会获得更强的染色效果 解决方法：采用较短时间热修复或酶消化重复实验 当前第35页\共有60页\编于星期三\20点 修复过度的实验组 当前第36页\共有60页\编于星期三\20点 修复过度的实验组 当前第37页\共有60页\编于星期三\20点