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三七根腐病发生与土壤微生物种群的关系 三七（b.h.chen）是五加科的一种独特植物。它是中国特有的稀有中药，主要种植在中国云南省凉山的一些地区。三七性喜温暖阴湿的多年生植物,通常采用免耕阴蔽的栽培方式。随着设施种植年限的延长,农药化肥施用量加大,导致栽培土壤障碍因素日益突出,根腐病害严重。因根腐病害的常年损失达5%~20%,严重的达70%,所造成的损失占各种三七病害的70%~85%,成为制约三七产业持续发展及农业生态环境建设的重要屏障。目前对三七根腐病的研究主要集中在病原菌分离、病害发生规律、栽培技术及其与生态因子的相关性研究,而针对三七发病土壤微生物菌群变化及其与三七根腐病害的相关性研究方面,难以查阅到相关的文献报道。 以土壤为载体的根际微生物是根际微生态系统的重要组成部分,参与土壤有机质分解、腐殖质形成、土壤养分转化和循环等一系列过程,其种群结构及活性变化是衡量土壤质量、维持土壤肥力和药材产量的一个重要指标。因此,土壤微生物群落的组成与活性在很大程度上决定了生物地球化学循环,被认为是表征土壤质量变化最敏感最有潜力的指标。土传性病害的发生、发病的程度一般与病原菌、益微生物及其寄主宿主在土壤生态环境条件下相互竞争、相互联系、相互制约有密切的关系。有文献报道增加有机P农药施用量及改变耕作措施等都会使土壤微生物数量和种群发生较大变化,施用光合细菌可以改善土壤微生物区系。土壤中大量的细菌、放线菌、真菌等一方面通过土壤调节功能促进植物生长,另一方面又通过生态位的竞争,抑制和制约病原菌的生长而显著控制土传病害的发生与发展。因此,通过对三七免耕种植定位研究,探索根际土壤微生物群落组成变化与根腐病害的相关性,为三七根腐病害的预测预报及其生物防治技术的研究提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 苏集山水势积水生态桑树林模式 试验于2006年1月—12月在文山三七研究院砚山试验基地进行。试验点地处北回归线附近的低纬高原地带,属亚热带大陆性季风气候区,海拔1 255 m,经纬度104.199°N、23.392 2°E,年均气温16.5℃,年均降雨量900~1 000 mm,降雨日150天;年平均日照1 934.9 h;平均相对湿度79%。种植模式采取人工建棚栽培,棚顶为遮阳网覆盖,雨水能自由渗漏,已3年免耕种植,地表覆盖物为松毛。试验选用同一个三七棚中2年生三七种植土壤为研究对象,每个试验小区面积均为15 m2(10 m×1.5 m),并设3重复调查区,每小区插入3支地温表测量土壤表层至10 cm深土壤温度。 1.2 采样点的采集 土壤采样均于每月下旬进行,去除表层覆盖物,每小区分别采用S形法进行采样,采集12个样点,混合后以四分法取舍,装入新保鲜袋,4℃冰箱保存备用,取样土层0~10 cm。 1.3 酵母菌和酵母发酵 采用稀释平板法进行土壤微生物测定:其中细菌用1%葡萄糖的牛肉膏蛋白胨培养基平板计数,30℃下培养,培养基内部菌落计为厌氧生长,基表菌落计为好氧生长数,二者之和为可培养细菌总数;酵母菌用培养基(麦芽膏1%、酵母膏0.3%、Mg SO40.1%、尿素0.1%、KH2PO40.02%、Na2HPO40.2%、p H 7.0~7.2,倒平板前加入青霉素、链霉素),培养温度30℃;霉菌与放线菌方法相同,霉菌以马丁氏(Martin)培养基,放线菌用高氏(Gause)1号培养基并加有青霉素、链霉素,涂布平板法计数,培养温度25℃,计数的稀释度为100倍。 1.4 发病植株相关症状确认 三七根腐病的大田鉴定,根据缪作清等的方法,试验中对根腐病的发病类型不进行分类,只要出现相关症状,均确认为发病。发病率以发病植株占所调查植株的比例计。相对湿度、降雨量、日照及有效积温等气象资料由当地气象站提供。数据资料采用SPSS12.0软件包及Excel软件进行分析。 2 结果与讨论 2.1 气候因素与三组根腐病发病的关系 试验区域的降雨多集中在夏季的6—8月,约占全年降雨量的70%左右,是试验区中温度最高的季节及三七根腐病害高发期。因此,对定位点的气候因素月变化与发病率进行了统计(表1)及其相关性分析(图1)。结果发现除试验点有效积温与三七根腐病间存在明显的直线相关外,平均地温、相对湿度、降雨量及日照与三七根腐病发病率间均不存在统计学意义上的直线相关性(p0.05)。说明三七发病与试验点气候间的关系相对复杂,同时也暗示有效积温有可能影响到设施栽培三七根际微生物菌群的变化,从而导致根腐病的发生。对试验点气候因素与三七发病率间进行曲线回归分析(图2),结果表明在逻辑函数模型下平均地温、相对湿度、降雨量及平均日照与发病率间均存在显著的相关性,其拟合度分别为0.099、0.570、0.040、0.479。尽管其拟合度都不高,但这种显著性相关性表明,这些因素对三七根腐