DB35T 1338-2013化妆品中天然红4 含量测试方法.docxVIP

ICS 71.100.70 Y 42 福 建 省 地 DB35 方 标 准 DB35/T 1338—2013 化妆品中天然红 4 含量测试方法 Determination of natural red 4 in cosmetics 2013-08-01 发布 2013-11-01 实施 福 建省 质量技 术监 督局 发 布 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》给出的规则编写。 本标准由福建省质量技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：福建省产品质量检验研究院。 本标准主要起草人： 林钦、游飞明、戴明、郑小严、谢勇。 化妆品中天然红 4 含量测定方法 1 范围 本标准规定了高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法测试化妆品中天然红4含量的方法。 本方法适用于化妆品中天然红4含量的测定。 本方法液相色谱法天然红4 (以胭脂虫红酸计) 的检出限为0.2 mg/kg；液相色谱-串联质谱法天然 红4 (以胭脂虫红酸计)的检出限为0.1 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单) 适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008，neq ISO 3696：1987) 3 高效液相色谱法 3.1 方法原理 试样采用盐酸溶液在沸水浴下提取， 用聚酰胺固相萃取小柱富集、净化，氨水/甲醇溶液洗脱后注 入高效液相色谱仪—紫外检测器进行测定，外标法定量。 3.2 试剂和材料 除另有说明外， 所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。 3.2.1 甲醇： 色谱纯。 3.2.2 乙腈： 色谱纯。 3.2.3 甲酸： 优级纯。 3.2.4 氨水： 优级纯。 3.2.5 盐酸： 36%-38%。 3.2.6 洗脱液配制：250 ml 甲醇+250 ml 水+5.0 ml 氨水。 3.2.7 稀释液配制：250 ml 甲醇+250 ml 水+5.0 ml 甲酸。 3.2.8 聚酰胺固相萃取小柱制作： 取 3 ml 的固相萃取用空柱， 下端放一筛板，将粒度为 74 μm~ 150 μm (100 目~200 目) 的聚酰胺粉加入甲醇成浆状，湿法装填， 上筛板用玻璃棒压实，聚酰胺填料 的厚度约为 2 cm。使用前用 2 ml 酸化甲醇(500 ml 甲醇+10 ml 甲酸)和 2 ml 水淋洗活化。 3.2.9 胭脂虫红酸(CAS 1260-17-9，C22H20O13，纯度 98.5%) 。 3.2.10 胭脂虫红酸标准溶液 准确称取20.0 mg胭脂虫红酸标准品，加水溶解定容到100 ml，准确移取适量混合标准储备液， 用 稀释液稀释成0.4 μg/ml、0.8 μg/ml、1.0 μg/ml、2.0 μg/ml、5.0 μg/ml系列标准溶液。 3.3 仪器和设备 仪器和设备如下： a) 高效液相色谱仪：配紫外检测器； b) 涡旋混合器； c) 冷冻高速离心机：15000 r/min； d) 固相萃取装置； e) 超声波振荡器； f) 分析天平：感量 0.0001 g； g) 移液枪：100 μl~1000 μ l； h) 一次性过滤头： 聚四氟乙烯(PTFE)， 0.2 μm。 3.4 分析步骤 3.4.1 试样的制备与提取净化 称取均匀试样约2.5 g (精确到0.0001 g)于50 ml离心管中， 加入2 mol/l HCl 10.0 ml，旋紧盖 子，置于沸水浴中提取30 min。取出冷却至室温后加入15.0 ml甲醇， 振摇混匀，置于离心机中，15000 r/min离心5 min。取5.0 ml上清液于10 ml试管中， 加入5 ml水混匀。将溶液移入聚酰胺小柱， 控制流 速1 ml/min~2 ml/min，用5 ml水淋洗小柱， 抽干。用2.0 ml洗脱液洗脱并用5 ml刻度试管收集，加入 300 μl甲酸并用水定容到2.5 ml，混匀， 用一次性过滤头(3.3.8) 过滤后，供测定。 3.4.2 高效液相色谱操作条件 高效液相色谱操作条件如下： a) 色谱柱：C18 柱， 150 mm× 4.6 mm (内径)， 粒径 5 μm，或相当者； b) 柱温： 35 ℃； c) 紫外检测波长： 276 nm； d) 进样量：20 μ l； e) 流动相及梯度条件见表 1: 表1 流动相及梯度表 时间 min 流速 ml/min 0.3%甲酸 % 乙腈 % 0 1.0 80 20 2.0 1.0 8