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皮肤病理石蜡切片 概述（1）修材（2）固定（3）脱水（4）透明（5）浸蜡（6）包埋（7）切片（8）摊片（ 9 ）烤片（10）脱蜡（11）脱苯（水）→蒸馏水（12）染色（13）脱水（14）透明（15）封片 修材一般修材不超过1.5×1×0.2cm 但在实际工作中，平均修材在1.0 ×0.5 ×0.2cm左右比较： 我们修材的大小一般要比口腔医院修的组织块小。大概有黄豆粒大小。原因： 口腔医院包埋机提供的包埋框大小适宜，包埋时受组织大小的影响较小，而我们手工包埋大的组织较困难。注意：组织块的大小修材受实际病变程度的影响，不能墨守常规，一概而论。 固定中性10％福尔马林 1hAF液 0.5－1h功能：①保持原有组织形态，防止细菌腐蚀标本。 ②AF液是固定和脱水过程中的过渡阶段，缓冲组织的收缩。注意：口腔组织与皮肤组织的区别，不一定完全符合此种固定方法。议: AF液相当于90%乙醇进行脱水，时间较短，简略了梯度酒精脱水的完整性，是否造成组织收缩程度加大？比较： 增加了AF液，相对比我们固定标本节约了约5个小时。 脱水95%乙醇 1-1.5h无水乙醇Ⅰ ≧1.5h无水乙醇Ⅱ ≧1.5h功能： 脱去组织中的水分，以便石蜡浸入。注意：①水和石蜡不相容，需脱水彻底，以便制备出好的切片。 ②无水乙醇同样具有使组织收缩变硬的影响，故不能时间过长。比较： ①我们95%乙醇采用两步脱水，以减小收缩力。 ②无水乙醇的脱水时间不超过2h，与此相比较，相差将近2倍。议：无水乙醇脱水3-4h皮肤组织会不会变硬？3-4h 透明功能: 二甲苯是酒精和石蜡的共同溶剂（媒剂）目的是为石蜡的浸入作媒介。二甲苯Ⅰ 20min二甲苯Ⅱ 20min注意：二甲苯也能使组织变硬，故时间不宜过长。如果时间过长组织变硬，可以在香柏油中进行软化。议：松节油透明较慢，我们会不会透明不彻底？是否加长透明时间？比较： 透明时间都相同，但我们用的是松节油进行组织透明。 浸蜡干燥箱温度65-70℃ ≧1.5h功能： 石蜡溶解二甲苯，已达到石蜡浸入整个组织的目的。注意：干燥箱中的温度过高或不稳，使组织变脆或烫伤，造成切片困难，不能制成理想的切片。议：石蜡的厂家（物理性能）不同，是否影响浸蜡的时间和切片？比较： 我们的干燥箱温度不稳，在72-84℃之间波动。 包埋注意： ①手工包埋时蜡的温度不宜过高，最好做到组织的温度与蜡的温度相同。 ②蜡块上下两端应当修平，但留余蜡，否则切片弯曲不直，或无法连成带状，左右两端应不留余蜡，若余蜡过多时，是切片容易褶皱。比较： 手工包埋，温度不宜掌握！包埋机进行！ 切片切3μm厚度 单次切片比较：4-5μm厚度，连续切片单次切片的特点：组织片不易褶皱 切片的时间较长 粘片的组织较少切片机：LEICA（莱卡)RM 2255LEICA（莱卡)RM2235 摊片比较： 水浴温度不稳32-45 ℃极易造成组织片摊不开或张力过大而裂开。由于我们是连续切片，所 以玻片上的组织片大于四个。水浴温度37℃每个玻片黏贴两个组织片 烤片烤箱温度55℃ ≧1.5h功能：是组织切片能够与玻片粘在一起，防止在染色过程中脱片。注意：烤片过程中温度不能过高，防止烫伤组织。比较： 我们烤箱温度不稳，在82 ℃左右烤≧1h。 脱蜡二甲苯Ⅰ ≧12min二甲苯Ⅱ ≧ 12min功能：二甲苯溶解切片中的石蜡，以便染色。注意：二甲苯脱蜡的时间不能太短，已达到脱蜡彻底的目的，否则不易染色！（石蜡不与染液结合）比较： 时间都在20min左右，基本相同。 脱苯（水）→蒸馏水无水乙醇 2min95%乙醇 2min80%乙醇 数秒70%乙醇 数秒流水冲洗 1-2min蒸馏水 洗过反酒精梯度功能：脱去组织上多余的苯，使组织梯度进水水，进而染色。比较： 我们没有反酒精梯度脱水，只用了95%乙醇进行脱苯1min。注意：如果组织进入95%乙醇中有云雾状现象，说明二甲苯没有脱彻底或乙醇过陈旧、不纯。 染色苏木素 5-10min流水冲洗 数分钟酸酒精（分化） 数秒流水冲洗 ≧2min1%氨水（反蓝