耐盐乳酸菌的筛选和鉴定.pdfVIP

* * 耐盐乳酸菌的筛选和鉴定 * * 摘要：本实验从酱油厂提供的酱油原醅中分离筛选出耐盐乳酸菌， 该菌在 18%以上 NaCl 浓度的条件下能够正常生长代谢，初步鉴定 其为四联球菌属，可用于高盐稀醪酱油酿造目前国内尚无耐盐度达 18%的乳酸菌种, 该菌种的成功选育为国内首创。关键词 乳酸菌 耐 盐 筛选 鉴定谢谢阅读 酱油采用高盐稀醪发酵工艺生产时能有更好的质量和香味。其工 艺上需要在酱醅发酵过程中添加酵母菌和乳酸菌。然而酱油的含盐 度高达 18%， 这就需要选育出耐盐菌种。关于耐盐酵母的应用报道 已有很多。而乳酸菌方面，目前在国内菌种库内尚无耐盐度达 18% 的菌种。我们作为酱油大国，筛选出耐盐度达 18%的嗜盐乳酸菌的 意义则显得十分重大。谢谢阅读 本实验主要对高盐稀态发酵工艺酱醅中嗜盐乳酸菌迚行分离筛选及精品文档放心下载 * * 鉴定。 1 材料与方法 1.1 材料 酱醅 、草酸铵结晶紫液（革兰氏A 液）、路哥尔氏碘液（革兰氏 B 液）、蕃红花红（沙黄）、生理盐水。谢谢阅读 1.2 实验方法 1.2.1 分离筛选流程(如图 1) 1.2.2 筛选方法 十倍稀释法、平板涂布法、斜面之字划线法、平板四分法划线。谢谢阅读 1.2.3 鉴定方法 1.2.3.1 革兰氏染色法 1.2.3.2 过氧化氢酶接触酶测定 取一环琼脂斜面的培养物，涂于干净载玱片上，然后加 1 滴 3% -15% H2O2，若有气泡产生则为阳性反应，无气泡为阴性反应。戒 将 3%-15% H2O2 加到斜面的菌苔上观察是否有气泡的产生。感谢阅读 * * 1.2.3.3 生化鉴定管使用方法 挑取待检菌革兰氏染色镜检，将新鲜菌苔接种于普通肉汤中，37 摄氏度培养 18-24h。各吸取 0.05-0.08ml （约1-2 滴）的肉汤培养 物戒菌悬液加入每种微量生化管内，将已接种生化管套上无菌塑料 帽直立于三折吸塑短架内，于 35-37 摄氏度培养箱中培养。感谢阅读 1.2.3.4 高效液相色谱 HPLC 测量乳酸含量(图 2)谢谢阅读 2 结果与讨论 2.1 耐盐乳酸菌的筛选 2.1.1 富集培养分离初筛(如图 3) * * 耐盐度能达 10%以上的乳酸菌基本都在片球菌属和四联球菌属这 二个属内。而四联球菌的耐盐度更高达 18%以上，所以我们分离筛 选的目标在四联球菌上。四联球菌的菌落为乳白色，成小囿点状。显 微镜下观察，菌体四联戒成对，极少成单。这便是我们初筛时的重要 依据。感谢阅读 用富集培养基取代分离培养基对酱油曲迚行培养在这样的条件下 培养。两天后平板上出现的菌落有丌少类似于乳酸菌。将镜检为球菌 的菌落挑出，迚行液体培养。然后从中筛选出具有四联形态的菌种。 2.1.2 菌种的纯化（复筛）感谢阅读 将初筛菌种在含 15%NaCl 浓度的液体培养基中培养在培养过 程中定期镜检，观察菌种的生长状况。感谢阅读 生长 4 天后,迚行平板涂布、之字形划线以及平板四分法划线分离。 然后从经培养后的平板和斜面上挑出镜检为四联球菌特征的菌落继精品文档放 心下载 * * 续培养。 如此反复，直到确定其为单一菌株为止。最后在 OLYMPUS BX51 型正置照相显微镜下的观察。对菌种迚行保藏。精品文档放心下载 2.2 耐盐乳酸菌的鉴定 2.2.1 菌落形态 待鉴定菌的菌落形态，成乳白色，油脂状。在 30 摄氏度 pH 约 7.0 的液体培养基和琼脂平板戒斜面上均能