RNAi诺贝尔生理学奖或医学奖.pptVIP

RNAi诺贝尔生理学奖或医学奖;内容摘要;一、获奖者简介; 诺贝尔奖评审委员会的公报中称：“他们的发现澄清了许多令人迷惑和矛盾的试验结果。揭开了大自然控制遗传信息传递的一种基本机制，他们开创了一个崭新的研究领域。”法尔和梅洛获奖是因为他们“发现了控制遗传信息流动的基本机制”，这一机制为控制基因信息提供了基础性的依据。公报指出，RNAi已被广泛用作研究基因功能的一种手段，并有望在未来帮助科学家开发出治疗疾病的新疗法。 ;二、RNAi现象的发现;4、 1998年，Andrew Fire和Craig C. Mello等的研究证明，在正义RNA阻断了基因表达的试验中，真正起作用的是双链RNA, 同时包含了正义链和反义链的双链RNA (double—stranded RNA，dsRNA)阻断基因表达的效果要比单独注射正义链或者反义链强得多。Fire和Mello把他们的结果发表在1998年2月19日的《Nature》杂志上，他们的发现澄清了此前一系列令人们感到困惑的实验现象，并且揭示出了一种遗传信息流动的控制机制。;;三、RNAi现象分子机理;2、分子机理：在RNAi起始阶段，长链dsRNA结合到一个特异的内切酶Dicer上，并被Dicer切割成21-23nt小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）。然后，另外一种蛋白复合物RISC(RNA Inducing Silencing Complex，包含了双链RNA解旋所必需的蛋白)与这些siRNA结合在一起 。siRNA分子的一条链被去掉，但另外一条链结合在RISC复合物上作为一个探针去识别mRNA分子。当一个mRNA分子可以和RISC复合物上的RNA片段配对时，它就结合到复合物上,在距离 3端 12个碱基处切割靶向 mRNA,从而引起转录后基因沉默。 ;First step;3、该技术有3个重要特点： 第一，它具有高效性。从刚开始的21~23个核苷酸小干 扰RNA分子，到后来研究应用的小发夹RNA分子，都具有高 效抑制作用，抑制率在90%以上； 第二，有严格的序列特异性针对变异基因设计的RNA分 子抑制异常基因，而正常基因不受影响； 第三，具有高度的稳定性。化学性质很稳定，不需要修 饰。;四、RNAi的应用;2、RNAi是调节基因表达的一种机制 在人类和线虫的细胞中RNAi可以用于调节基因的表达。人体基因组中有数百个基因编码被称为microRNA的小RNA分子。它们含有其他基因的部分密码。这样的microRNA可以形成双链RNA结构并激活RNA机制阻止蛋白质合成，使那一特定基因的表达沉默。由此，microRNA的遗传调节在生物有机体的发育及细胞功能的控制中起重要作用。 ;3、RNAi是基因组功能研究的有力工具 利用RNAi使靶基因沉默在单个基因功能研究中已经得巨大成功。其主要原理是：RNAi主要通过在转录后水平阻断基因的表达，使特定基因的mRNA破坏，导致蛋白质无法合成，出现“基因沉默”。这样，通过关闭基因的表达，当某一特定基因被“沉默”后，其功能便反向的体现出来了。 ;;1.siRNA的一般结构： 哺乳动物：21-23bp dsRNA 其它生物：更长的片段;2.设计流程（选择siRNA靶位点） 从转录本AUG起始密码子开始，搜寻下游AA序列，记录跟每个AA 3’端相邻的19个核苷酸作为候选的siRNA靶位点；根据5‘和3’非翻译区（UTR)及靠近起始密码子（75个碱基之内）等富含调节蛋白结合位点区域来设计siRNA。 将候选靶位点与相应的基因组数据库比较，去掉哪些与其它编码序列同源的靶序列。 设计阴性对照：阴性对照siRNA应与siRNA的核苷酸组成相同但没有与基因组明显同源的序列。一般通过改变siRNA核苷酸顺序并经同源序列比较确证而得。; 化学合成 体外转录（载体/反应体系） 转录载体体内转录 ;;;;教学资料整理RNAi诺贝尔生理学奖或医学奖;内容摘要;一、获奖者简介; 诺贝尔奖评审委员会的公报中称：“他们的发现澄清了许多令人迷惑和矛盾的试验结果。揭开了大自然控制遗传信息传递的一种基本机制，他们开创了一个崭新的研究领域。”法尔和梅洛获奖是因为他们“发现了控制遗传信息流动的基本机制”，这一机制为控制基因信息提供了基础性的依据。公报指出，RNAi已被广泛用作研究基因功能的一种手段，并有望在未来帮助科学家开发出治疗疾病的新疗法。 ;二、RNAi现象的发现;4、 1998年，Andrew Fire和Craig C. Mello等的研究证明，在正义RNA阻断了基因表达的试验中，真正起作用的是双链RNA, 同时包含了正义链和反义