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原位pcr技术在核酸检测中的应用 20世纪70年代，原始酸分子杂交技术（ish）开发。通过碱基互补原则，标记准样品可用于研究组织、细胞和组织中的准分酸段的定位。为了改善细胞、细胞和染色体中核酸的定位，它具有精确的定位特征，广泛应用于细胞生物学、遗传等学科。1985年PCR技术的出现兴起了分子生物学的热潮,PCR通过聚合酶链反应将目的核酸序列按指数倍扩增,成为获得特异性核酸片段或放大基因信号的有效手段。Haase A T等首次报道了原位PCR方法,检测到了初期感染绵羊脉络膜丛细胞的维斯纳病毒RNA反转录出的少量DNA片段,这一方法将原位杂交的定位和PCR的敏感性结合起来,大大地提高了原位杂交对低复制样品检测的敏感性,克服了PCR技术因扩增产物无法在细胞组织中定位而不能与形态学特征结合的不足,成功定位检测到细胞或组织样品中的极少量甚至单个核酸序列。作为一种分子生物学技术,原位PCR与传统病理组织学方法密切结合,较好的将定性、定位以及相对定量技术联系起来,将形态、代谢和功能的研究在分子水平统一起来,在病理学研究和病理学诊断中得到了迅速的发展。 1 pcr扩增产物的制备方法 将细胞悬液或固定于涂片、载片、冰冻切片、石蜡切片上的组织细胞用消化酶处理,以获得适当的膜通透性,使PCR反应体系组分到达细胞内目的核酸片段,通过聚合酶链反应扩增后,再使用核酸探针进行杂交,观察扩增产物与组织细胞结构和