石蜡切片免疫组化及免疫荧光染色方法.docxVIP

白腊切片免疫组化及免疫荧光染色方法 1、组织的采集、固定和保留： 采纳组织后， 方法一：4%多聚甲醛（4%PFA）4C固定1小时（依据组织大小和致密程度调整固准时间）或留宿 方法二：采纳bouin’s固定RT2h（6-8dtesis）orRT留宿（成年tesis） PBS缓冲液洗三次，每次5min，4C保留于70%乙醇中。 2、组织的包埋、切片、展片及保留：： 固定后的样品经梯度乙醇脱水、二甲苯透明，52-54C白腊包埋，惯例切片，切片厚4-10m，贴于办理 过的洁净载玻片上，37C烤片留宿，以后采集于载片盒中，RT密封保留。 白腊包埋： 保留于4C70%乙醇中的组织样品 80%乙醇15min 95%乙醇15min 100%乙醇15min2 1/2乙醇1/2二甲苯15min 二甲苯透明5-10min 1/2二甲苯1/2白腊30min 白腊（1） 白腊（2） 白腊（3）包埋 RT保留 、白腊组织切片的免疫组化方法： 密封保留于RT的组织切片 二甲苯(1)20min 二甲苯(2)20min 100%乙醇20min 95%乙醇10min 80%乙醇10min 通风橱晾干，阻水笔在组织四周画圈 切片在PBS中浸泡5min*2 %TritonxRT10min 切片在PBS中浸泡5min*3 3%H2O2RT10min 切片在PBS中浸泡5min*3 %胰酶RT10min 切片在PBS中浸泡