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鼠源性mcab的基因工程研究进展 自1975年kore和milson发现异质结杂交瘤技术以来，已广泛用于疾病的诊断和治疗。老鼠杂交瘤是单克隆抗体的第一个可靠来源，但通过临床反复使用可以引起老鼠的抗虫性反应。随着工程技术的发展和抗虫性分子遗传的深入研究，阐明了免疫球蛋白的遗传结构与dna重组技术的有机结合。将免疫球蛋白分子移植到基因水平后，将其移植到被遗传因子中，丙烯酸酶是继克隆抗体和单克隆抗体之后的第三代抗生素酶。 1 mcab的改造 为了克服鼠源性Mc Ab的缺陷,近年应用基因工程技术对鼠源性Mc Ab进行改造,其基本做法是保留鼠源性抗体与抗原特异性结合的部分,其余则用编码人抗体的相应部分基因替代. 1.1 表达人——鼠嵌合抗体 抗体作为异源性蛋白诱发免疫应答的免疫原性主要存在于恒定区.从鼠源性杂交瘤细胞中分离出功能性可变区基因,与人Ig恒定区的基因拼接,插入适当质粒,构建人——鼠嵌合的重链和轻链基因质粒载体,共同转染宿主细胞,表达人——鼠嵌合抗体.它完整地保留了亲本鼠Mc Ab的特异性和亲和力,同时大大降低了鼠Mc Ab的异源性,目前已批准在临床用于治疗非何杰金氏淋巴瘤的Rituximab就属于此类抗体. 1.2 人抗体的设计 改形抗体是将鼠Mc Ab的CDR(complementarity determinative region)移植到人抗体的骨架区上,使人抗体获得鼠Mc Ab的特异性,最大限度地减少了鼠Mc Ab的异源性.研究表明,仅仅保留鼠源性Mc Ab的CDR是远远不够的,常常会导致改形抗体亲和力急剧下降,鼠源Mc Ab的骨架区存在一些重要的残基,对于正确形成有效的抗原结合部位有重要作用.因此,设计改形抗体的关键在于选择合适的人抗体重链和轻链作为鼠CDR的移植框架. 2 小分子抗体 小分子抗体因其分子量小,穿透性强、抗原性低,可在原核系统表达以及易于进行基因工程操作等优点而倍受重视. 2.1 重链式表型抗体 抗体的Fab段主要发挥抗体结合抗原的功能.Fab抗体是对Fab段进行基因改造而获得的基因工程抗体,包括重链的VH-CH1和轻链的VL-CL,是异二聚体,较适于分泌型表达,不适于通过包涵体大量表达.其特点是结构稳定,制作简便.但其表达有时会比Sc Fv低,可能与两条链在细菌周质腔中的折叠有关. 2.2 scfv在合成基因抗体中的应用 Sc Fv是由抗体重链可变区和轻链可变区通过一段连接肽(linker)连接而成的重组蛋白,能较好保持抗原亲和活性,具有分子量小,穿透力强及免疫原性低等特点,易与效应分子相连构建多种新功能的抗体分子,是构建免疫毒素和双特异性抗体的理想元件.因此,Sc Fv成为基因工程抗体研究领域中的热点.通过构建双价Sc Fv,可改善Sc Fv的亲和活性.将噬菌体表面展示技术应用于Sc Fv的筛选,可筛选出高亲和力和特异性更强的Sc Fv等. 2.3 diabody在免疫治疗和免疫诊断方面的应用 将单链抗体中2个可变区之间的接头缩短,迫使2个分子间VH和VL配对,形成双价小分子抗体,其结合性能优于单价分子,如将2种不同特异性的可变区基因交叉配对,则可得到双特异性Diabody.通过与基因III融合,Diabody成功地表达在噬菌体表面.初步研究表明,Diabody在免疫治疗和免疫诊断方面有着广阔的应用前景. 3 抗炎与抗体教育 如果能用人的免疫球蛋白基因取代小鼠的免疫球蛋白基因,从免疫小鼠获得的就是人的而非小鼠的抗体,此技术虽然有较大难度,但近年来已取得引人注目的进展.为了沉默动物宿主抗体基因的表达,鼠胚胎干细胞(embryonic stemcell,ES细胞)的Ig H和Igκ位点被应用同源性重组技术删除JH和Cκ区而灭活.将人抗体基因克隆到酵母人工染色体(yeast artificial chromosomes,YACs),YAC重组物被整合入鼠胚胎细胞,被选择的ES细胞经显微注入母体得到含人抗体Ig H和Igκ位点序列的杂交鼠(chimericmouse),该鼠可同时表达重链和轻链.免疫后的转基因鼠能产生高亲和力的抗体,多项研究已经表明,用转基因鼠产生的人源抗体可提高抗体使用的效果及安全性,而且由于发生了亲和力成熟过程使抗体特异性更高,有助于一些慢性疾病,如自身免疫性疾病、炎症、癌症的治疗. 4 采用活性物质检测细胞的活性 植物抗体(Plantibody)与哺乳动物细胞系或转基因动物产生抗体比较,具有价廉、高效、安全等优点.1995年,Ma等制备了一种能识别变异链球菌细胞表面蛋白的植物抗体——分泌型二聚体Ig A/G(SIg A/G),该抗体在烟草植物中生产并用于治疗龋病,用这种抗体治疗自愿者,成功地防止了变异链球菌定居口腔,疗效可达4个月,研究者拟将这种抗体作为牙膏的一种成分.最近Bouq