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医学检验中应用的核酸检测技术 现在，人类疾病与疾病直接或间接关系。原子能成像和分析在遗传疾病、肿瘤和传染性疾病等领域的应用越来越广泛。这为疾病的诊断和治疗提供了新思路，并与疾病有关的疾病的发病机制有关。医学实验室所要检测和分析的核酸既包括人体本身的基因 (DNA) 以及反映基因转录水平的mRNA, 也包括侵入人体的致病微生物等所携带的外源性基因 (DNA或RNA) 。现介绍医学检验中应用的核酸检测技术及其进展。 一、 样品的制备 1. 细胞匀浆和dna纯化 常用材料多为人白细胞或组织细胞, 前者取EDTA-Na2抗凝全血用NH4Cl或双蒸水作低渗溶血处理, 洗涤后即可得, 因肝素会抑制限制性内切酶和DNA多聚酶的活性, 故血液抗凝剂一般不用肝素, 组织细胞则须先用匀浆器在冰浴中研磨成细胞匀浆。上述经预处理的细胞经十二烷基硫酸钠 (SDS) 和蛋白酶K作用消化分解蛋白质, 继用一定比例的酚、氯仿、异戊醇抽提液将蛋白质除去, 所得的DNA溶液用乙醇沉淀或透析等方法进一步纯化, 现已有多种商品化的DNA分离试剂盒供应。DNA纯度和含量的测定用比色法, 在紫外分光光度计上测定A230nm、A260nm和A280nm值, DNA (双链) 含量为A280nm值×50 μg/ml×比色时的稀释倍数,A260nm/A280nm比值1.7示纯度较高,A260nm/A280nm比值2.0表明含酚等