第三章荧光分光光度法.pptVIP

d. 试样量少且方法简便 采用荧光微池，只要用10?L试液即可。 e. 能同时提供较多的物理参数 包括：激发光谱、发射光谱、荧光强度、荧光总量、极值峰位、谱带宽度、量子产率、荧光寿命和荧光偏振等参数。 第九十三页，共一百三十四页，2022年，8月28日 (2) 注意事项 a. 溶剂和化学试剂 对于溶剂，一是选择要适当，二是要足够纯。在使用波段范围内，选用的溶剂应无吸收才好；另外溶剂中也不应含有卤素、硝基化合物等，否则会降低荧光强度。 对于化学试剂，越纯越好。 第九十四页，共一百三十四页，2022年，8月28日 引起荧光熄灭的原因很多，机理也很复杂。下面讨论几种导致荧光熄灭的主要类型。 第六十一页，共一百三十四页，2022年，8月28日 （a）碰撞熄灭 碰撞熄灭是荧光熄灭的主要原因。 它是指处于单重激发态的荧光物质分子M*与熄灭剂Q发生碰撞后，使激发态分子以无辐射跃迁方式回到基态，因而产生荧光熄灭作用。 　 第六十二页，共一百三十四页，2022年，8月28日 碰撞熄灭的定量方程： F0/F-1=k [Q] 上式称为：Stern- Volmer方程式。 式中：k为熄灭常数；[Q]为熄灭剂浓度，单位mol?L-1；F0、F分别为熄灭剂不存在和存在时，溶液的荧光强度。 第六十三页，共一百三十四页，2022年，8月28日 ?）熄灭常数（k）与体系的粘度有关系，粘度越大，k越小； ?）熄灭常数（k）与体系的温度有关系，温度升高，k也升高；温度每升高1 ?C，k值增加在2 %以下； ?）熄灭剂的浓度[Q]不得大于10 mol?L-1。 第六十四页，共一百三十四页，2022年，8月28日 （b）组成化合物的熄灭 　　有些荧光熄灭现象不能用碰撞熄灭理论来解释。 例如：某些荧光物质溶液在加入一些熄灭剂之后， （*）溶液的吸收光谱有了显著的改变； （*）溶液的荧光强度显著降低。 第六十五页，共一百三十四页，2022年，8月28日 又如：某些荧光物质的溶液在加入熄灭剂之后，它的荧光强度随着温度的升高而增强。 以上几种情况都是因为组成化合物的熄灭所致。 第六十六页，共一百三十四页，2022年，8月28日 上述情况可能是： 络合 M + Q ? MQ （有荧光） （无荧光） 分解 MQ ? M +Q （ T?，荧光增强） 　　如果MQ的形成是由于强大的力，则MQ将具有它自己的特征吸收，因此溶液的吸收光谱也发生了改变。 第六十七页，共一百三十四页，2022年，8月28日 （c）转入三重线态（级）的熄灭 　　含溴化合物、碘化合物、硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物、羧基化合物及某些杂环化合物，容易转入三重线级，溶液中绝大部分转入三重线级的分子在一般温度下不发光，它们会将多余的能量消耗于它们与其它分子的碰撞之中，因而引起荧光熄灭。 　　　 第六十八页，共一百三十四页，2022年，8月28日 　 溶液中的溶解氧常对荧光产生熄灭作用。这可能是由于顺磁性的氧分子与处于单重激发态的荧光物质分子相互作用，促进形成顺磁性的三重态荧光分子，即加速系间窜跃所致。 实验证明：O2的熄灭作用，似乎是随着溶剂的介电常数的减小而增加，所以O2在水溶液中熄灭作用较小，而在有机溶剂中熄灭作用较强。 第六十九页，共一百三十四页，2022年，8月28日 （d）发生电子转移反应的熄灭 　 某些熄灭剂分子与荧光物质分子相互作用时，发生了电子转移的反应，即：氧化-还原反应，因而引起荧光的熄灭。 例如：甲基兰荧光溶液被Fe2+熄灭 D* + Fe2+? D- + Fe3+ 　　　 有荧光 　 无荧光 　　　 第七十页，共一百三十四页，2022年，8月28日 发生电子转移反应的熄灭剂并不限于金属离子；I-， Br-，S2O32-等易于给出电子的阴离子对奎宁、罗丹明及荧光素钠等有机荧光物质也会发生熄灭作用。 第七十一页，共一百三十四页，2022年，8月28日 （e）荧光物质的自熄灭 　　荧光物质溶液的浓度大于1g?L-1时，常常会发生自熄灭现象，所以液态纯物质的荧光一般都不强烈。 此种熄灭的原因：?）由于浓度大，分子碰撞几率大，因而引起能量损失大；?）溶液