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桃花芽休眠解除SSH文库构建及相关基因的功能分析的中期报告 本中期报告主要包括桃花芽休眠解除SSH文库构建和相关基因的功能分析两个部分。 一、桃花芽休眠解除SSH文库构建 1. 样本采集和RNA提取 从桃树的休眠期和解除期分别采集芽组织样品，分别命名为Dormant和Reactive。采集后，立即置于液氮中冷冻保存。使用Trizol试剂将样品中的RNA提取出来。 2. SSH文库构建 使用Clontech公司的SMARTer PCR cDNA合成试剂盒将两个样品的RNA转录成cDNA。随后，使用Clontech公司的PCR-Select cDNA Subtractive Hybridization Kit构建 SSH文库。其中，Dormant作为参比组，Reactive样品为试验组。最终得到了休眠期芽组织解除SSH文库。 3. 文库筛选和验证 对SSH文库进行筛选，筛选出不同ially expressed基因。使用qPCR对筛选到的基因进行验证，验证其在休眠期和解除期的表达模式是否与SSH文库中所述相同。 二、相关基因的功能分析 1. 基因注释和序列分析 使用NCBI的BLAST程序将SSH文库中所得的休眠解除相关基因序列进行注释和分析。根据BLAST查询结果，对相关基因的序列进行比对、聚类和进化分析。 2. 生物学功能分析 参看已有研究，对相关基因的生物学功能进行预测。通过广泛的