RT-PCR反应过程问题处理.docxVIP

第 第 PAGE 1 页 共 NUMPAGES 1 页 RT—PCR反应过程问题处置 逆转录（reversetranscription）是以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA引导下的DNA合成。 1.如何提高RT—PCR反应的灵敏度与特异性？ ①确定模板RNA完整性好，无DNA污染。 ②RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。 ③使用适量的模板RNA，模板量太多会降低特异性，太少会导致扩增不出条带或条带太弱。 ④若模板中有二级结构，可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。 2.RNA中含有逆转录抑制剂时，怎么处置？ 逆转录抑制剂包含：SDS、EDTA、甘油、焦磷酸钠、亚精胺和胍盐