第十六章基因诊断.pptxVIP

第十六章;二、基因诊断的概念界定以下6个方面内容：;三、基因诊断的思路;四、基因诊断方法和传统的疾病诊断方法;（六）基因诊断范围广 因为：①探针可为任何来源和种类，序列可为已知或未知，目标可为特定基因或特定基因组合，外源性或内源性基因，所以适应性强，诊断范围广。;（七）二者关系;细胞膜;（五）基因诊断与诊断学;（六）基因诊断的思维程序：;第二套 拿来主义;第二节 基因诊断的分子生物学基础;二、 基因诊断的技术;(二）聚合酶链式反应（PCR）;（四）限制酶酶谱分析 基因突变可能导致基因上某一限制酶位点的丢失或其相对位置发生改变，以此酶消化待测DNA和野生型对照 DNA，通过比较二者的酶切片段的长度、数量上的差异就可判断待测DNA的突变情况。;三、基因诊断的内容;四、基因诊断的途径;（二）外源基因的入侵的病原体的诊断;（3）结果分析： ①与正常探针杂交，而不和突变探针杂交表示受检者不存在这种基因； ②只与突变探针杂交，说明突变基因是纯合子； ③与正常/突变， 探针都可杂交， 说明突变基因是杂合子； ④与正常/突变探针都不杂交说明不是已发现的突变。 2、未知点突度 SSCP—PAGE法、测序法 提取DNA→DNA变性→SSCP—PAGE→ 测序确证 （二）少数较苷酸缺失或插入的诊断方法可以用（一）的方法;（五）基因扩增 限制酶酶切待测基因的DNA或CDNA片段作为探针（位置改变）法光密度扫描（定量）。 基因扩增→拷贝数增加（分子量）→电泳行为改变→杂交条带位置改变 →与标准/正常对照定性/量扫描。;（六）多态性分析;（3）关于基因连锁分析 ①多数遗传病诊断途径， 因为：经基因突变检测途径，适用病种有限，原因是： a、致病的基因可在任何位点上产生突变，致使同一疾病有不同的突变类型。 b、不少致病基因仅仅知道在哪一号染色体位置，尚未克隆出来，对其结构和分子机制毫无能知。 c、有的致病基因尚未确定。 ②基因连锁分析必须具备的先决条件： a、家系中的关键成员（父母）为RFLP的杂合子，才能区分两条同源染色体。连锁遗传病只要母亲为某一RFLP的杂合子即可。 b、子代存在患病的纯合子，这样才能确定??病基因与哪条染色体RFLP共同遗传。 c、任何一种遗传病、单独使用一种RFLP、均有相当一部分父母染色体无法区分、所以要联用若干种RFLP及相当探针，提交诊断。 d、待检亲代必须为生物学意义亲代。;③连锁不平衡并不多见： 指某一个多态性位点在基因和等位突变基因中的分布频率有显着差异。因此可用与特异等位基因连锁这一多态性进行基因诊断。如： 正常人酶切图谱有9/9、22/9、22/22kb型，β-地贫纯合子只有9/9kb型（kan发现撕工岛人β-珠蛋白基因3’BamHI的多态性位点）故不经家系分析，仅以这一多态性即可用产 前诊断。 ④RFLP连锁分析可能常是可靠的。连锁分析存在一定的错误原因是： a、人为差错。b、RFSP连锁分析方法本身的差错程度（方法本身局限性。） 因为在减数分裂中间传染色体的某些区域可以发生重组和交换，从而使得原先共同遗传的DNA突变与RFLP发生分离，这样情况下作出连锁分析结果就会发 生错误。诊断的错误率可以从DNA标志与疾病的共同遗传度来估计，重组率高于 5%的连锁探针不宜采用，事实表明，除个别情况外，由于染色体重组所致的错误诊断小于1%，因此，RFLP连锁分析通常是可靠的。;2、微小重复序列（如CA序列）多态性分析。;（七）基因表达异常的诊断。 1、mRNA相对定量;第三节 基因诊断的应用;相应氨基酸变化。;（二）杜氏肌营养不良症（DMD）和贝克营养不良症（BMD）;4.DMD、DNA诊断;（三）苯酮尿症（PKU）;4、DNA诊断：①PCR/ASO探针法。若待诊断的PKU家系的基因突变类型尚属“未知”或无 RFLP信息。②PCR/SSCP—直接则序法→不定期出导PKU的点突变。;四、血友病 是一种遗传性凝血功能障碍的出血性疾病，由于正常凝血过程中血浆凝血的活力有 缺陷所致。患者常因出血不止或继发病而夭折，治疗主要靠替代疗法，输入缺乏的血浆 因子。重型血友病甲和乙的男性发病率为1/5000~1/50000。为甲型血友病和乙型血友病。 主要特征：;①已克隆化FIXcDNA和DNA片段，鉴 定了FIX基因的5个限制者多态性位点，故可用RFLP连锁分析进行产 前诊断和携带者检测。 ②病倒：乙型血友家系分析FIX基因发现某患者缺失该基因5kbDNA 序列（第2~3外显子+第2内含子全部+部分第1，第3内含子） a、对该家系一例乙型血友病变高危妊娠产前基因诊断，诊断胎儿为男性乙型血友病患者。 b、对该孕妇第二胎产前诊断为女性乙型血友病基因携带者。 （上海医遗传所淅江乙型血友病家系）;类 别 1、病毒性肝炎 ①甲型肝炎（HAV）;