第二章 紫外-可见分光光度法.pptVIP

单色光、复合光、光的互补 吸光度A、透光率T与浓度c的关系 例如：2005版药典规定维生素B12鉴定： 2.4. 2 纯度检测 1．杂质检查 2．杂质限量的测定： 例：肾上腺素中微量杂质——肾上腺酮含量计算 2mg/mL -0.05mol/L的HCL溶液，λ=310nm下测定 规定 A310≤0.05 即符合要求的杂质限量≤0.06% 吸光系数法（绝对法） 解： a为待测组分，消去b的影响 b为待测组分，消去a的影响 解： 解： 解法一，对照法 例： 维生素B12的含量测定 精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称取对照品25.00mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液注射液的浓度以及标示量的百分含量（该B12注射液的标示量为100?g / mL）。 解法二，吸收系数法 2.4.5 多组分的测定方法 分三种情况： ① 两组分吸收光谱不重叠（互不干扰） 两组分在各自λmax处不重叠，分别按单组分测定。 ② 两组分吸收光谱有部分重叠 λ1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测ca λ2→测A2→a组分干扰→不能按单组分定量测cb ③ 两组分吸收光谱完全重叠—互有干扰 解线性方程组法 则 步骤： 当l=1cm时 定量分析原理 双波长吸光光度法 可测定混浊溶液，也可测定光谱重叠的两个混合组分。不需用空白参比溶液。 根据波长对?1?2的选择方法不同，可分为等吸收双波长消去法和系数倍率法 。 须满足两个基本条件： 在选定的两个波长处，干扰组分具有等吸收； 在选定的两个波长处，待测物的吸光度差值应足够大。 ① 等吸收双波长消去法 ② 系数倍率法 前提：干扰组分b(虚线)不成 峰形；无等吸收点。 如右图所示。 如图测x步骤：在y曲线上任找一点λ1，则得另一点λ2，设l=1cm 称掩蔽系数，倍率因子 优点：同时将待测组分和干扰组分的信号放大K倍， 提高了待测组分测定灵敏度 三波长分光光度法 也是一种消除共存干扰组分的测定方法。（略） 导数光谱即吸光度随波长的变化率对波长的曲线。对n阶导数而言，导数光谱即 优点：分辨力高；消除背景干扰 定量分析的理论基础 （自学） 导数分光光度法 例1 取咖啡酸，在165℃干燥至恒重，精密称取10.00mg，加少量乙醇溶解，转移至200mL容量瓶中，加水至刻度线，取此溶液5.00mL，置于50mL容量瓶中，加6mol/L的HCL 4mL，加水至刻度线。取此溶液于1cm比色池中，在323nm处测定吸光度为0.463，已知该波长处的 ，求咖啡酸百分含量。 例2 精密称取0.0500g样品，置于250mL容量瓶中，加入0.02 mol/L HCl溶解，稀释至刻度。准确吸取2mL，稀释至100mL。以0.02mol/L HCl为空白,在263nm处用1cm吸收池测定透光率为41.7%，其摩尔吸光系数为12000，被测物分子量为100.0，试计算263nm处 和样品的百分含量。 2.5 紫外-可见吸收光谱与有机物分子结构的关系 2.5.1 基本概念 紫外-可见吸收光谱的产生：运动的分子外层电子→吸收外来紫外-可见光→发生价电子能级跃迁→紫外-可见吸收光谱 吸收谱带的位置和强度与物质分子的结构有关 1. 电子跃迁类型 轨道：电子围绕原子或分子运动的几率分布。轨道不同，电子所具有能量也不同 。 有机分子中的价电子：σ电子，形成σ键 π电子，形成π键 n电子，不成键 成键轨道、反键轨道和非键轨道： 能量顺序σπn π*σ* 基态与激发态：电子吸收能量，由基态→激发态 (1).σ→σ*跃迁 饱和烃（甲烷，乙烷），所需能量很高，λ150nm（远紫外区） (2). π→π*跃迁 不饱和基团（—C＝C—，—C ＝O ），所需能量较小，λ约 200nm；强吸收，?＞104； 体系共轭，能量更小，λ更大。 电子跃迁类型 所需能量大小顺序：σ→σ* n →σ* π→π* n→π* (3). n→π*跃迁 含杂原子不饱和基团（—C≡N ，C＝O ），所需能量最小，λ 200~400nm（近紫外区）；弱吸收， ?＞10~100。 (4). n→σ*跃迁 含杂原子饱和基团（—OH，—NH2），所需能量较大，λ150~250nm（真空紫外区） 此外还有：