重组蛋白GGH的分离纯化及药效学初步评价的中期报告.docxVIP

重组蛋白GGH的分离纯化及药效学初步评价的中期报告 一、分离纯化 1.1. 表达构建： 在表达宿主E.coli BL21中转化pET-28b载体中含有人源GGH基因的质粒，获得含有源GGH基因的重组菌株。 1.2. 表达及提纯： 在IPTG诱导的条件下，成功表达了重组蛋白GGH，将菌液经过过滤、离心、柱层析分离，采用超滤、透析、浓缩等步骤对其进行了进一步纯化，成功得到了高度纯化的重组蛋白GGH。 1.3. 纯化鉴定： 将纯化后的重组蛋白GGH进行SDS电泳分析，结果表明得到了单条明显的蛋白带；同时采用Western blot检测了重组蛋白GGH的免疫原性，结果表明其与抗-His标签抗体为阳性反应。 二、药效学初步评价 2.1. 酶活力测定 采用戊巴比妥酸比色法，对分离纯化后的重组蛋白GGH的酶活力进行测定。结果显示，重组蛋白GGH表现出可靠的水解能力。 2.2. 生物学活性 采用人肝癌细胞株HepG2进行细胞增殖抑制实验，结果表明重组蛋白GGH能够有效抑制HepG2细胞增殖，表现出很好的生物学活性。 2.3. 性状鉴定 对重组蛋白GGH进行溶解度、热稳定性、pH稳定性、冻融稳定性等方面的性状鉴定，结果表明重组蛋白GGH稳定性良好，为稳定的蛋白质。 综上所述，我们成功地从表达宿主中获得了高度纯化的重组蛋白GGH，并且对其进行了初步的药效学鉴定。这为我们进一步研究重组蛋白GGH的生物学功能和药物学应用提供了重要的基础。