植物组织培养实验报告_2.docVIP

植物组织培养实验报告? 一、实验目的? 1．掌握无菌操作的植物组织培养方法；? 2．通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法；??3．通过诱导豌豆根、茎、叶形成愈伤组织?学习愈伤组织的建立方法；? 4．通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织?学习愈伤组织的建立方法；??5．了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育,?最终长成完整再生植株的过程,?加深对植物细胞的全能性的理解。? 二、实验原理??? （一）植物组织培养? ?植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。???? （二）植物细胞的全能性?? 植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。???? 组织的分化与器官建成? ?外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具有分生能力的小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。?? （四）培养基的组成? 培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近，似成功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维生素、植物激素（生长调节剂）和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。? 三、实验器材? 高压灭菌锅、超净工作台、电磁炉、接种器械（手术刀、剪刀、镊子）、接种器高温消毒器、标签、记号笔、烧杯、5mL 10mL 100mL量筒、1L容量瓶、喷雾器等。? 四、实验材料? ?石斛 五、实验药品? ?药品?、75%?酒精、蒸馏水、?蔗糖、琼脂、MS大量配制药品等。 实验配方 配方名称：Z 配方量：1L 培养瓶33瓶 配方：MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L + 3%蔗糖 + 0.7%琼脂 配方量 MS大量 微量 有机 Fe盐 激素 6-BA NAA 100mL 10mL 10mL 10mL 5mL 0.1mL 琼脂（7g/L） 蔗糖 30g/L 实验步骤 ?MS大量元素母液的配制 MS大量10倍（1L） 序号 名称 用量（g/L） 1 硝酸钾 19 2 硝酸铵 16.5 3 磷酸二氢钾 1.7 4 硫酸镁 3.7 5 氯化钙 4.4 称取MS母液配方药品于五个烧杯中 将五个烧杯中的样品分开溶解 将五个烧杯的药品在大烧杯中混匀 将混匀后的母液移至1L容量瓶中 定容、摇匀、转移至细口瓶中并贴上标签（母液名称，浓度，配制时间） 培养基的配制 取1L的大烧杯，加入适量的蒸馏水在电磁炉上加热至沸腾； 分别取配方中配制的母液放入小烧杯中，然后加入，边加边搅拌； 称取30g蔗糖加入，边加边搅拌； 称取8g琼脂加入，边加边搅拌，直至琼脂粉溶解； 定容至1L，调PH6.0左右； 将培养基分别分装于洗好的33个培养瓶中，并盖上盖子； 放入消毒灭菌锅灭菌，120℃灭菌20分钟左右； （灭菌水也一起放入灭菌） 灭菌后从灭菌锅中取出培养基，平放在实验台上令其冷却凝固。 将凝固的培养瓶转移至培养室中保存，等待接种。 接种操作 清洗超净工作台，用装有75%酒精的喷雾器喷洒实验台，并用清洁布快速（防止酒精挥发）擦洗试验台。 将培养基、接种瓶、无菌水、接种器械、接种器消毒器、装有75%酒精的喷雾器，依次有序摆放至操作台上，并保持一定的距离。 打开工作台风机和紫外灯灭菌30min。 对进入操作台工作区间的手用酒精进行杀毒消菌。 将消毒后的器械放入无菌水中冷却 打开接种瓶和培养基瓶盖，用冷却后的器械对接种材料进行切割分解处理，并转移至培养基中，盖上盖子 对使用过的器械进行冲洗并高温杀毒灭菌（每次接种前后都要对手和接种器械进行灭菌操作） 结束操作后将培养基转移至培养室中，并对超净工作台进行清洗。 等待观察结果，记录污染瓶数量 实验结果 污染率= 实验分析