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空肠弯曲菌cdtA、cdtB、cdtC基因构建与表达的中期报告
空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是一种常见的肠道病原菌，是导致人类急性细菌性食物中毒的主要病原体之一。该菌属于革兰氏阴性杆菌，其产生的细胞毒素是导致细菌性食物中毒的重要原因之一。其中，细胞中毒素（cytolethal distending toxin，CDT）是目前已知最强的毒力因子之一，能够引起宿主胞质纤维和细胞核DNA合成的突变和损伤。因此，研究空肠弯曲菌CDT的结构与功能，对于认识其发病机理和开发相应的治疗方法具有重要意义。
本实验室通过PCR技术从空肠弯曲菌基因组DNA中扩增出cdtA、cdtB、cdtC三个基因，进一步进行了构建和表达。
首先，通过限制性内切酶切割和连接技术，将cdtA、cdtB、cdtC基因与pET28a载体中T7启动子和His标签序列连接，得到了包含cdtA、cdtB、cdtC三个基因的重组质粒pET28a-cdtABC。该重组质粒正确性通过酶切、测序、蛋白质表达等多种方法进行验证，确保了该质粒的可靠性和稳定性。
随后，将pET28a-cdtABC重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，利用IPTG诱导蛋白的表达。表达结果通过SDS和Western blot分析进行鉴定。结果表明，IPTG诱导蛋白表达后，BL21（DE3）中产生了一个分子量为约110 kDa的His标签融合蛋白，符合CDT的研究结果。Western blot验证进一步表明，表达的蛋白能够被His标签特异性抗体识别。
总之，本实验顺利地构建和表达了cdtA、cdtB、cdtC基因，为进一步研究其结构和功能提供了重要的基础。
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