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草鱼呼肠孤病毒诱导FHM细胞凋亡及表达VP6蛋白重组杆状病毒的构建的中期报告 本文中期报告分为两部分，分别是草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus，GCRV）诱导FHM细胞凋亡及表达VP6蛋白重组杆状病毒的构建。 一、GCRV诱导FHM细胞凋亡 为了研究GCRV对FHM细胞的影响，我们首先建立了GCRV诱导FHM细胞凋亡的模型。采用CCK-8法和流式细胞术分别检测了FHM细胞在不同时间点（0，12，24，36，48 h）和不同浓度（MOI=0，0.1，0.5，1，5，10）的GCRV感染下的细胞存活率和凋亡率。结果表明，GCRV感染后，FHM细胞的存活率随时间和病毒浓度的增加而显著下降，而凋亡率则呈现出时间和浓度依赖性的增加趋势。通过电子显微镜观察，发现GCRV感染后，FHM细胞出现了典型的凋亡形态学特征，包括胞体体积缩小、胞浆凝固、核染色质浓缩和核裂解等，证明了GCRV对FHM细胞的凋亡诱导作用。 二、VP6蛋白重组杆状病毒的构建 VP6是一种重要的杆状病毒核衣壳蛋白，在杆状病毒疫苗和诊断试剂的开发中具有广泛的应用前景。为了构建VP6蛋白的重组杆状病毒，我们首先通过RT-PCR方法从GCRV感染的FHM细胞中扩增得到了VP6基因。然后将VP6基因克隆到真核表达载体pCAGGS中，并构建了pCAGGS-VP6重组质粒。接着，采用腺病毒辅助转染法（Ad helper-dependent system）将重组质粒导入HEK293细胞中，并检测了转染后的细胞中VP6的表达情况。Western blot分析结果表明，VP6蛋白在转染后的HEK293细胞中得到了较高水平的表达，并且表达的形式和杆状病毒中的VP6蛋白类似。这为后续进一步构建VP6重组杆状病毒奠定了基础。 总之，本研究通过GCRV感染FHM细胞，建立了一种GCRV诱导FHM细胞凋亡的模型，并构建了VP6蛋白重组杆状病毒的重要中间产物。这项工作为进一步阐明GCRV的致病机理和生物学特性，以及开发杆状病毒相关疫苗和诊断试剂提供了有力支持。