2010猪血清白蛋白的分.pdfVIP

血血清清白白蛋蛋白白的的 分分离离、、纯纯化化与与鉴鉴定定 –血血清清白白蛋蛋白白是是血血浆浆中中含含量量最最丰丰富富的的蛋蛋白白质质，，约约占占总总 量量的的6600％％。。 –它它是是一一种种水水溶溶性性很很强强的的蛋蛋白白，， 构构稳稳定定，，能能 合合多多 种种小小分分子子，，如如脂脂肪肪酸酸，，胆胆红红素素，，血血红红素素等等，，起起维维持持 血血液液的的正正常常渗渗透透压压作作用用。。 –此此外外白白蛋蛋白白还还有有解解毒毒、、参参与与脂脂类类代代谢谢及及血血浆浆中中微微溶溶 物物质质的的运运输输、、维维持持血血液液酸酸碱碱平平衡衡等等作作用用，，在在医医学学临临 床床及及生生物物领领域域应应用用广广泛泛 。。 实实验验目目的的 1.掌掌握握血血液液样样品品的的正正确确处处理理和和制制备备方方法法 2.掌掌握握血血清清白白蛋蛋白白粗粗分分离离的的一一般般方方法法 3.掌掌握握离离 交交换换法法分分离离纯纯化化蛋蛋白白质质 4.掌掌握握蛋蛋白白质质纯纯度度检检测测的的方方法法 5.掌掌握握SSDDSS--聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝胶胶电电泳泳测测定定蛋蛋白白质质分分 量量 的的原原理理和和方方法法 6.学学会会考考马马斯斯亮亮蓝蓝法法测测定定蛋蛋白白质质含含量量 原原理理与与操操作作 留留样样：：22，， 血血清清的的制制备备 白白蛋蛋白白的的分分离离 留留样样：：11 留留样样：：44,,…… 白白蛋蛋白白的的纯纯化化 白白蛋蛋白白纯纯度度的的 蛋蛋白白质质含含量量的的 白白蛋蛋白白的的相相对对分分 检检测测 子子质质量量的的测测定定 测测定定 一一、、血血清清白白蛋蛋白白的的分分离离 •11 采采血血 •22 血血清清分分离离 •33 盐盐析析法法分分离离血血清清白白蛋蛋白白 •44 除除盐盐 • 收收集集血血清清：： 取取22 mmLL血血液液，，44 ℃℃，，33,,000000 rrppmm 　　离离心心1155 mmiinn，，用用移移液液枪枪吸吸取取上上清清 血血清清））11 mmLL至至1100 mmLL离离心心管管；；留留00..11mmLL 样样11））至至11..55 mmLL离离心心管管，，用用于于测测定定蛋蛋白白质质含含量量和和电电泳泳.. 盐盐析析：：中中性性盐盐使使蛋蛋白白质质从从溶溶液液中中析析出出的的过过程程。。 •中中性性盐盐并并不不破破坏坏蛋蛋白白质质的的分分子子结结构构和和性性质质，，因因 此此，，除除 中中性性盐盐或或减减低低盐盐的的浓浓度度，，蛋蛋白白质质就就会会 重重新新溶溶解解。。 •分分级级盐盐析析实实现现蛋蛋白白质质的的分分离离纯纯化化。。 •在在血血清清中中加加入入硫硫酸酸铵铵，，当当饱饱和和度度为为5500%%时时，，血血 清清白白蛋蛋白白不不沉沉淀淀，，球球蛋蛋白白析析出出，，饱饱和和度度达达5555%%，， 白白蛋蛋白白析析出出。。 •量量筒筒量量取取99 mmll底底液液 （（5500 %%的的饱饱和和硫硫酸酸铵铵溶溶 液液）），，用用移移液液管管逐逐滴滴加加入入，，不不断断 晃晃。。44 ℃℃ 静静置置22 hh；； •44 ℃℃，，1133,,000000 rrppmm离离心心2200 mmiinn，，收收集集上上清清，， 留留00..55 mmll （（样样22））至至11..55 mmll离离心心管管，，用用于于测测 定定蛋蛋白白质质含含量量和和电电泳泳；； •用用55%%的的柠柠檬檬酸酸缓缓冲冲液液