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由HCV包膜蛋白点突变研究脂蛋白在病毒生命周期中的作用的中期报告
本研究旨在探究HCV包膜蛋白点突变对脂蛋白在病毒生命周期中的作用的影响。本中期报告主要介绍实验设计及初步结果。
实验设计:
1. 采用HCV JFH-1株感染HEK 293T细胞,使用免疫印迹法检测感染后细胞内脂蛋白B和C等脂蛋白的表达水平;
2. 通过PCR技术构建突变体,将HCV包膜蛋白中位于E1和E2连接区域的氨基酸序列替换成对应的突变体氨基酸序列;
3. 利用Western blot检测突变后的HCV包膜蛋白在HEK 293T细胞内的表达情况,并比较与野生型HCV的差异;
4. 通过逆转录实时聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测HCV RNA的复制情况及病毒载量。
初步结果:
1. 实验成功构建了突变型HCV JFH-1株,并使用Western blot技术证实了HCV包膜蛋白点突变对其表达有影响;
2. 感染后,HEK 293T细胞内脂蛋白B和C等脂蛋白表达水平与野生型HCV感染组相比,存在一定程度的降低;
3. qRT-PCR结果显示,突变型HCV JFH-1株的复制情况与野生型HCV JFH-1株相比,存在显著差异,但还需要进一步验证。
结论:
本研究初步证实了HCV包膜蛋白点突变对脂蛋白在病毒生命周期中的作用具有一定影响。但是,由于研究还处于中期,实验结果有限,因此需要进一步深入研究。
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