《食品分析》课件——第八章 蛋白质和氨基酸的测定.pptVIP

消化：将消化完全的消化液，完全转入100mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。 蒸馏：冷凝管下端浸入接受瓶液面之下（瓶内预先装有10mL,２%硼酸溶液及混合指示剂2-3滴）。 准确移取消化稀释液２－10mL于反应管内，经漏斗再加入10mL，40%氢氧化钠溶液使呈强碱性，用少量蒸馏水洗漏斗数次，夹好漏斗夹，进行水蒸气蒸馏。 当吸收液变绿色时，继续蒸馏10min后,将冷凝管出口离开液面继续蒸馏1min，用蒸馏水淋洗尖端后停止蒸馏。 滴定：溜出液用0.0500mol/LHCl标准溶液滴定至微红色为终点。 与常量法不同点： 加入硼酸量有50 mL →10 mL； 滴定用盐酸浓度由0.1 mol/L →0.0500 mol/L ； 蒸馏装置： 操作方法 消化：要将消化完全后的消化液定容到100mL容量瓶。 装置的安装 蒸馏、吸收：与常量法不同的是 取样品定容液10mL，1/10 吸收液硼酸10mL 用水蒸汽蒸出氨 滴定：滴定用0.0500mol/L HCl标准溶液。 注意问题： 在蒸汽发生瓶中要加入硫酸和甲基橙使呈酸性以防氨蒸出； 加碱量要足，操作要迅速，漏斗要采用水封防氨逸出； 注意控制热源使蒸汽产生稳定，不能太猛或太弱； 要注意各蒸汽控制夹子的操作，以防蒸汽受阻爆炸或吸收液倒吸。 （三）自动凯氏定氮法 1、原理及适用范围同前 2、特点： （1）消化装置用优质玻璃制成的凯氏消化瓶，红外线加热的消化炉。 （2）快速：一次可同时消化20个样品，30分钟可消化完毕。 （3）自动：自动加碱蒸馏，自动吸收和滴定，自动数字显示装置。可计算总氮百分含量并记录，12分钟完成1个样。 凯氏定氮仪 作业题 详述微量凯氏定氮测定小麦粉、牛奶蛋白质的测定步骤？ 思考题 1、分光光度法测定原理中催化剂是什么？缓冲溶液的作用是什么？标准系列是什么？ 2、分别说出分光光度法测定所用的试剂的作用 3、请说出本法中标曲的横坐标的单位和刻度值 4、解释分光光度法公式里的字母和数字代表的是什么? 5、燃烧法测定蛋白质的原理和仪器？ 6、甲醛滴定法测定氨基酸的原理？测定是氨基酸的类型？ 7、GB5009.124—2016 测定是氨基酸的类型？测定了哪些种类的氨基酸？哪些蛋白氨基酸不能测？ 8、GB5009.124—2016 测定的原理？ 二、分光光度法 1.原理 食品中的蛋白质在催化加热条件下，分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸氨，在PH4.8的乙酸钠-乙酸缓冲溶液中与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氢化吡啶化合物。在波长400nm下测定吸光度值，与标准系列比较定量，结果乘以换算系数，即为蛋白质含量。 2.试剂与材料 硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸 氢氧化钠溶液(300g/L):称取30g氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100mL。 对硝基苯酚指示剂溶液(1g/L):称取0.1g对硝基苯酚指示剂溶于20mL95%乙醇中，加水稀释至100mL。 乙酸溶液(1mol/L):量取5.8mL乙酸，加水稀释至100mL。 乙酸钠溶液(1mol/L):称取41g无水乙酸钠或68g乙酸钠(CH3COONa·3H2O) ，加水溶解后并稀释至500mL。 乙酸钠-乙酸缓冲溶液:量取60mL乙酸钠溶液与40mL乙酸溶液混合，该溶液PH4.8。 显色剂：15mL甲醛与7.8mL乙酰丙酮混合，加水稀释至100mL，剧烈振摇混匀(室温下放置稳定3d)。 氨氮标准贮备溶液(以氮计)(1.0g/L):称取105℃干燥2h的硫酸铵0.4720g，加水溶解后移于100mL容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，此溶液每mL相当于1.0mg氨。 氨氮标准使用溶液 (0.1g/L):用移液管吸取10.00mL氨氮标准贮备液于100mL容量瓶内，加水定容至刻度，混匀，此溶液每mL相当于0.1mg氮。 3.仪器与设备 分光光度计 电热恒温水浴锅 10mL具塞玻璃比色管 4.分析步骤 试样消解： 称取经粉碎混匀过40目筛的固体试样0.1g~0.5g(精确至0.001g)，移入干燥的100mL或250mL定氮瓶中，加入0.1g硫酸铜、1g硫酸钾及5mL硫酸，摇匀后于瓶口放一小漏斗，将定氮瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。缓慢加热，待内容物完全炭化、泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至溶液呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷。 慢慢加入20mL蒸馏水，放冷后移入50mL或100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，并加水至刻度，混匀备用。按同一方法做试剂空白试验。 试样溶液的制备： 吸取2.00mL~5.00m