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PRRS RT-qPCR检测试剂盒的研制及其应用的中期报告 本研究旨在研发一种高效、灵敏、特异的PRRS（猪繁殖与呼吸综合征） RT-qPCR检测试剂盒，并评估其在临床上的应用价值。 一、方法 1.1 选取PRRS病毒HUN4株为阳性对照，采用SYBR Green I荧光探针，设计针对病毒基因组特异区域的引物和探针。 1.2 优化引物和探针的浓度和反应条件，建立RT-qPCR实验体系。 1.3 对检测灵敏度、特异性、重复性、稳定性、线性范围、反应时间进行验证。 1.4 应用该RT-qPCR检测试剂盒对100份临床样本进行检测，与病毒分离培养及其他检测方法进行比较。 二、结果 2.1 RT-qPCR实验体系建立成功，最佳反应条件为：50℃，30min反转录，95℃，10min初性变性酶活化，35个循环（95℃，15s；60℃，60s）实时荧光检测。 2.2 RT-qPCR检测试剂盒对PRRS病毒具有较高的灵敏度，检测限可达10个拷贝/ul。 2.3 RT-qPCR检测试剂盒具有良好的特异性，未对其他病原体产生交叉反应。 2.4 RT-qPCR检测试剂盒重复性好，CV值小于2%，稳定性也良好。 2.5 RT-qPCR检测试剂盒的线性范围为10~10^8个拷贝/ul，反应时间短，可靠性高。 2.6 对100份临床样本进行检测，RT-qPCR检测试剂盒与病毒分离培养及其他检测方法的符合率达