靶向性抗肿瘤VEGF-aGal融合蛋白的原核表达及其体外活性的中期报告.docxVIP

靶向性抗肿瘤VEGF-aGal融合蛋白的原核表达及其体外活性的中期报告 本实验以靶向性抗肿瘤VEGF-aGal融合蛋白为研究对象，采用原核表达技术获得蛋白的大量表达，并对其体外活性进行初步测试。 首先，设计了含有VEGF-aGal融合蛋白基因的重组质粒，并通过PCR验证其正确性。接着，将重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，初始浓度达到OD600 0.6-0.8的菌液在IPTG诱导下，经过4小时的培养后，收获细菌细胞，超声破碎细胞，离心取得包含可溶性蛋白的上清液。经过SDS和Western blot检测，确认蛋白质的成功表达，并得到预期大小的蛋白带。 进一步地，采用BSA标准曲线法测定了VEGF-aGal融合蛋白表达量，并进行了纯化。使用质谱分析证实了纯化后的VEGF-aGal融合蛋白的分子量符合预期。 最后，考察了VEGF-aGal融合蛋白在体外的活性。通过ELISA法测定，证明了融合蛋白对VEGF的结合亲和力较高，这表明VEGF-aGal融合蛋白具有抗VEGF的生物学活性。 综上，我们成功地采用原核表达技术制备了VEGF-aGal融合蛋白，并初步证明了其在体外的生物学活性，为下一步的进一步研究奠定了基础。