非洲猪瘟病毒荧光PCR检测的试验误差及临界值样品的重复性.pptxVIP

非洲猪瘟病毒荧光PCR检测的试验误差 及临界值样品的重复性 ; 01; 技术成熟 结果可靠 应用闭环 操作熟练 质量稳定; IDEXX; 人员操作、 软件使用差异; 时机、部位、方法、保存液、保存温度、运输时间.. 部位、取样量、稀释液与样品的比例、研磨或匀 浆是否彻底、抗凝剂成分、抑制成分是否去除、 离心的转速、样品中的病原是否灭活等。 试剂盒提取效率、污染防护、抑制成分等。; 拭子样品是否混匀、混样是否充分、抽样代表性。 加样量是否准确、是否正确使用加样器、量程是 否与加样量匹配。; 偶然误差 SD = CV =;;;;;;; 对比曲线; LOD6测定方法 将已知拷贝数的靶基因进行系列稀释 ，使其终浓度至少包括100、 50、20、 10、 5、 2、 1 、 0.1拷贝/反应的稀释度 ，每个稀释度做6个重复 ，该方法应重复3 轮 ，每轮重新系列稀释 ，即每个稀释度做18次检测 ，3轮检测均为阳性的最低拷贝 数/反应为 LOD6。0.1拷贝/反应是用来验证稀释是否准确 ，6次重复检测 ，0.1拷贝/ 反应不应多于1个阳性 ，否则靶基因的浓度应修正。; 复核结果—— 图1 森康复检：4个重复 ，检出一次。 图2 IDEXX复检 ：3个重复 ，检出一次。 图3 间隔4小时重新提取核酸 ，结果6个重复 ，检出一次。; 复核结果—— 图4、 5 23号样品重复4次检出一个 ，24号样品重复4次全部检出。 图6、7GPS试剂盒复检 ，23号样品重复4次检出一个 ，24号样品重复4次 ，3次检出。;;; 480机器;; 按试剂盒说明书判定： 即重复一次 ，若为 阳性则判为阳性 ，若为阴性则判为阴性。 作阳性处理： 如果对试验有把握 ， 阳性不 是由于污染原因造成 ，样品的来源地要彻 底消毒 ，对来源于猪的拭子样品 ，要对该 猪加强监管 ，一个星期后重新采样复检。 验证试验： 建议对样品进行6次复孔检验， 若出现一孔及以上阳性 ，则判为阳性。; 耗材检测结果; 做好非洲猪瘟病毒荧光PCR检测工作; 结束