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elisa反应体系中的血清免疫清度 1 elisa反应 采样为兔子血清。固相载体用p H值9.6的碳酸盐 (CBS) 缓冲液将兔抗血清作适当稀释, 包被ELISA反应板, 4℃过夜。然后用含0.05%吐温-20的磷酸盐缓冲液 (PBST) 洗板3次, 再用2%卵白蛋白室温封闭1小时。洗板3次后备用。液相, 从1∶4开始, 将每份被检血清作2倍系列稀释, 将等体积的水疱性口炎病毒的糖蛋白 (70%反应的稀释物) 加到各份样品中, 并于37℃孵育1小时, 然后将混合物的50微升转移到ELISA反应板中, 每个稀释度加2个孔, 置于轨道振荡器上于37℃反应30分钟。试验中同时进行标准阴性血清和阳性血清对照。 将与包被血清相应的水疱性口炎病毒的单价或多价的豚鼠抗血清用PBST作适当稀释, 分别加到相应的孔中, 置轨道振荡器上37℃振荡30分钟。将辣根过氧化物酶标记的兔抗豚鼠Ig G用PBST作适当稀释后加入各孔, 置轨道振荡器上37℃反应30分钟。每孔加入50微升新配置的含0.04%邻苯二胺和0.15%过氧化氢水溶液的磷酸盐-柠檬酸缓冲液, 室温下反应15分钟。1摩尔/升硫酸终止反应, 每孔50微升。酶标测定仪测定492纳米处的光吸收值。 结果判定:以阴性血清对照的OD值降低到50%时的log10表示50%终点滴度。滴度大于1∶20时, 被认为是阳性. 2 小鼠血清中的辣根过氧化物酶活性