项目十一典型发酵产品红霉素（硫氰酸盐）生产工艺课件.pptxVIP

项目十一;红霉素（erythromycin，Er）是红色糖多孢菌的次级代谢产物，其抗菌谱和青霉素G相似，特别对抗酸杆菌、革兰氏阳性细菌、大病毒及立克次氏体有抗菌活性。红霉素为十四元大环内酯类抗生素，其分子是由红霉素内酯、红霉素糖和脱氧氨基己糖三部分组成。;硫氰酸红霉素不仅是兽用抗生素，还是大环内酯类 原料药的母核，是合成国际医药市场上十分畅销的三大半合成红霉素（阿奇霉素、罗红霉素和克拉霉素）的关键中间体原料，从而，奠定了硫氰酸红霉素在国际医药原料药市场上的强势地位。 我国早在上世纪60年代已开始生产红霉素，80年代 末至90年代初才开始试生产硫氰酸红霉素。进入21世纪，国际市场包括我国对硫氰酸红霉素需求的不断上升。;;;斜面孢子特征：高产菌落边缘圆、灰色，中间凸起正中有凹陷、中间白色，个别有梅花型，扎根较深。 斜面培养时间及其变化情况;2、摇瓶菌丝制备 培养基配比为：蔗糖3%，玉米浆1.6%，硫酸铵 0.2%，碳酸钙0.7%，黄豆油0.5mL/300mL三角瓶， 20%NaOH调pH5.5左右。培养条件：在34℃、 220～240rpm摇瓶机振荡培养24h左右。;1、种子罐和发酵罐培养基配比;2、培养基灭菌 中、小罐及糖、油罐均采用实罐消毒方式进行灭菌，正丙醇采用闷消方式灭菌。发酵罐采用连消方式灭菌。;消毒时，小罐、中罐、油罐及糖罐均预热到70～80℃再进汽。大罐配料时预热到65～70℃时打料。正丙醇管道的消毒压力必须保持在 0.2MPa，消毒45min。丙醇计量罐，一般每周消毒一次。油管道消毒压力0.2MPa，时间为45min左右。糖罐道消毒压力0.3MPa，时间为 60min左右。;3、一级种子培养 培养基灭菌后，罐温降至37℃时，采用微孔压差法将摇动 瓶种子或孢子接入罐中培养。罐温全程控制在34±0.5℃，通入无菌空气，空气流量0.8～1.0vvm，罐压0.05MPa，全程开搅拌，转速140rpm。培养过程中每过段时间需取样作无菌试验，测pH、PMV（指菌体沉淀物体积）值，10h后取样观察菌丝形态，30h开始测黏度。 培养33h左右菌丝形态呈网状，菌丝体粗壮，分枝少，染色 深且均匀，PMV在12%以上，pH回升至6.6左右，无杂菌，即可移入二级种子罐。;4、二级种子罐培养 培养基灭菌后，罐温降至34??时，用压差法将符合质量要 求的一级种子接入二级罐中。全程控制罐温34±0.5℃，空气流量保持0.8～1.0vvm，罐压控制0.05～0.06MPa，全程搅拌，转速130rpm。 培养过程中，每过段时间需取样作无菌试验，测pH、PMV、 粘度，观察菌丝形态。培养13h左右，镜检菌丝呈网状， 菌丝体细、长、直、分枝少，染色均匀，PMV在20%以上，无杂菌，即可移入大罐。;5、发酵罐培养 培养基灭菌后，罐温降到36℃时，将搅拌转速调到80rpm， 空气流量调至3000m3/h，罐压维持在0.025MPa，调溶氧 显示100%，然后停搅拌接种，接种后，罐温控制34±0.5℃，搅拌转速80rpm，空气流量3000m3/ｈ。 培养过程中控制溶氧、pH,并流加补入糖、醇、油，其原则 是：;6、发酵过程菌丝形态生长变化;1、预处理 将发酵液放入预处理罐，待放到一半时，开启搅拌和空气 搅拌（如有空气搅拌），边放罐边加ZnSO4和15%～20%的NaOH维持pH7.0～8.0，待发酵液放完时，加够ZnSO4，调节pH8.0～8.4。ZnSO4加入量控制在3%～5%（w/v），并控制滤速在8mL/5min以上，ZnSO4尽量少加，然后进板 框压滤机压滤。 发酵液预处理工艺控制点:发酵液的碱化pH控制在8.0～8.4， 滤液pH控制在7.5～8.0，温度20～30℃，滤液单位2500～ 4000U/mL，NaOH配制浓度20%。;2、萃取（采用二级逆流静态提取） 在提取罐中加入上批二级提取的丁酯（如是第一次，则加 入新鲜丁酯），将已经用15%～20%NaOH溶液调好 pH10.1±0.1的碱化液（调碱后的滤液）打入提取罐中。边打边滴入2%的破乳剂。 打完后，开动空气搅拌8～10min。静置1h后分层，转出下 层水相进入另一罐进行二级萃取（新鲜丁酯已经打入备提取用）。 上层丁酯相经碟片式高速离心机分离，分离出清亮透明丁 酯相即为红霉素抽提轻液。;醋酸丁酯萃取工艺控制要点： pH以pH计测定为准，一级萃取pH 10.1±0.1，二级萃取pH 10.5±0.1；醋酸丁酯加入量一级按1/12～1/13（v/v）加入，二级按1/15～1/16（v/v）加入；抽提温度32℃左右；丁酯萃取液要求清亮，无明显乳化层。;3、成盐结晶 将分离轻液打入结晶罐中，升温至43℃，加入1/10（v/v）的饱和食盐水搅拌洗涤15min，然后静置45min分层，分尽下层乳化层和