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精卵孵育时间对胚胎质量及结局的影响 在体育外受刺激的胚胎移植（ivf-et）中，精子的情况直接关系到治疗的效果。一些报道认为短时受精有利于胚胎质量及种植潜能的提高,有些报道则未得出同样的结论。目前国内少数中心已采用短时受精法,多数中心仍延用传统过夜受精法,甚至对短时受精不了解或持有疑问。本研究对比分析了短时受精与传统受精(精卵过夜)两种精卵孵育时间的临床与实验室资料,旨在探讨短时受精对体外受精-胚胎移植治疗周期中的应用价值。 1 数据和方法 1.1 对大鼠学习周期和获卵数的影响 2005年1月~2006年12月在本中心因输卵管阻塞和/或男方因素接受IVF-ET治疗的患者168例189个周期,随机分成两组:短时受精组(A组)79例96个周期,年龄25~38岁,平均(30.5±4.8)岁,平均获卵数(11.2±3.5)个;传统受精组(B组)89例93个周期,年龄23~37岁,平均(29.8±3.7)岁,平均获卵数(10.2±3.7)个,以上数据两组间经统计学分析,差异无统计学意义(P0.05)。两组中又根据男方精液是否正常,分为精液正常组和精液异常组(中重度精液异常),精液参数按WHO标准判定。 1.2 方法 1.2.1 保乳剂、水湿地、fsh或hgm 189个周期均采用长方案。于前次月经周期黄体中期给予长效促性腺激素激动剂GnRHa(Dipherline 1.0 mg~1.125 mg,Biotech Signes,法国)皮下注射1次,进行降调节,行经后第3天测定血FSH、LH、E2水平,达降调水平后,给予FSH(Gonal-F,serono,瑞士)和/或HMG(丽珠,珠海)促排卵。根据卵泡生长情况适时调整药量。当有1个以上卵泡直径≥18 mm,或2个以上卵泡直径≥17 mm时,当晚9时注射HCG 5 000~10 000 U,36 h后在B超引导下经阴道取卵。 1.2.2 液体准备 手淫法取精于一次性无菌广口杯中,液化后视精液具体情况用密度梯度离心和/或上游法洗精。 1.2.3 精卵共孵育和发育 根据卵-冠-丘复合物评估获取卵子的成熟度。取卵4~6 h后,按精卵2~5万∶1比例混合法受精。短时受精精卵共孵育2 h后,将卵子转移至新鲜的已平衡过的受精培养液中,传统受精组精卵共孵育过夜,第2天去掉卵子周围的颗粒细胞,清洗后转入卵裂培养基中,倒置显微镜下观察受精情况。受精卵继续培养48 h后,观察胚胎发育情况,然后选择优质胚胎进行移植。 1.3 第三，胚胎质量评价标准 根据参考文献进行。胚胎达6细胞以上,Ⅰ~Ⅱ级胚胎为优质胚胎。 1.4 统计方法 均数比较采用t检验,率的比较采用χ2检验。以P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 个周期及体质量比与优质胚胎率的比较 短时受精组96个周期共获卵1 078个,其受精率、多精受精率、卵裂率及优质胚胎率见附表。传统受精组93个周期共获卵949个,其受精率、多精受精率、卵裂率及优质胚胎率见附表。短时受精组与传统受精组相比较,受精率、多精受精率、卵裂率差异无统计学意义(P0.05),而优质胚胎率,前者明显高于后者,差异有统计学意义(P0.05)。其中A1、A2组优质胚胎率显著高于B2组(P分别0.01、0.05)。见附表。 2.2 两组临床妊娠率、胚胎种植率比较 短时受精组(A组)临床妊娠率、胚胎种植率显著高于传统受精组(B组,P分别0.01、0.05),其中A1、A2组临床妊娠率、胚胎种植率均显著高于B2组(P分别0.05、0.01)。流产率各组间差异无统计学意义(P0.05)。见附表。 3 讨论 3.1 耗培养液对iiif-et治疗的影响 本研究结果显示,短时受精组的受精率、卵裂率、流产率与传统受精组比较,差异无统计学意义,而优质胚胎率、临床妊娠率、胚胎种植率高于后者,即短时受精不但不会降低受精率、卵裂率,反而使优质胚胎率、临床妊娠率、胚胎种植率升高,流产率不变。分析原因可能与以下几点有关:①传统受精组卵子与高密度精子长时间作用,精子代谢产物堆积,加之驱散的颗粒细胞及死精子等均会消耗培养液的能量,使卵子处于一个营养不良的环境中。②颗粒细胞、精子代谢产生的活性氧化物(reactive oxygen species,ROS)可造成不饱和脂肪酸的过氧化,使细胞膜的流动性受到影响,从而使胞浆膜硬化,影响胚胎的分裂、发育、孵出与植入,继而影响IVF-ET治疗的结果。动物实验已证实了这一点,并通过向培养液中添加抗氧化剂来促使细胞分裂而获成功。③研究表明,卵-冠-丘复合物中的颗粒细胞可产生E2、P,并随培养时间延长浓度增高,而体外高浓度E2、P对胚胎有直接的毒性作用。④精液质量问题。在IVF-ET治疗中,胚胎质量不好时,人们总习惯去考虑卵子的质量问题,而忽略精子的因素。其实,当精液质量差时,常