魏氏梭菌α毒素基因的克隆表达及间接ELISA方法的初步研究的中期报告.docxVIP

魏氏梭菌α毒素基因的克隆表达及间接ELISA方法的初步研究的中期报告 【摘要】 本研究旨在克隆表达魏氏梭菌( Clostridium difficile，CD) α毒素基因并建立间接ELISA检测方法。首先利用PCR方法从CD ATCC 9689菌株中扩增α毒素基因，然后将其克隆至pET-32a(+)载体中，转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行表达。经SDS和Western blotting检测发现，α毒素表达成功，分子量为90kDa。利用经过纯化的α毒素进行酶联免疫吸附试验(ELISA)，建立间接ELISA检测方法。结果表明，本方法对α毒素的检测具有良好的灵敏度和特异性。 【关键词】 魏氏梭菌；α毒素；基因克隆表达；间接ELISA 【Abstract】 The aim of this study was to clone and express the α-toxin gene of Clostridium difficile (CD) and establish an indirect ELISA method to detect this toxin. First, the α-toxin gene was amplified from CD ATCC 9689 strain by PCR and then cloned into the pET-32a(+) vect