耦合法分析玉米叶绿体Trx调节靶蛋白氧化还原态及其活性的中期报告.docxVIP

耦合法分析玉米叶绿体Trx调节靶蛋白氧化还原态及其活性的中期报告 本研究旨在使用耦合法分析玉米叶绿体中Trx（硫氧还蛋白那-C末端的二硫键通过Trx的NADP依赖还原酶系统还原）的调节靶蛋白的氧化还原态及其活性。在本次中期报告中，我们已经完成了以下实验工作： 1. 玉米叶绿体的分离和提取 我们从玉米叶片中分离了叶绿体，并用等渗液缓冲液（pH7.8）提取了其蛋白质。通过SDS凝胶电泳验证，我们成功提取了叶绿体蛋白。 2. 制备玉米叶绿体Trx 利用酵母表达系统，我们成功制备了玉米叶绿体Trx的重组蛋白并进行了纯化。SDS凝胶电泳显示，我们得到了纯度较高的重组蛋白。 3. 确定玉米叶绿体Trx的还原活性 使用反相高效液相色谱仪（HPLC）对不同浓度的还原型DTT和氧化型H2O2作用于玉米叶绿体Trx的还原活性进行了测定。结果表明，玉米叶绿体Trx对还原型DTT的KM为1.01 mM，Vmax为14.5 nmol/mg/min；对氧化型H2O2的KM为4.58 μM，Vmax为8.6 nmol/mg/min。 4. 筛选玉米叶绿体Trx调节靶蛋白 利用亲和层析法，我们筛选了玉米叶绿体中具有Trx结合结构域（TrxR）的蛋白。经过动态光散射和分子量测定，我们鉴定了一种分子量为35 kDa的蛋白。 目前，我们的研究进展良好，下一步将进行Trx与筛选到的靶蛋白之间的相互作用分析及其对靶蛋白活性