中国热带农业科学院环境与植物保护研究所柑橘黄龙病检测中心通过CMA资质认定.docxVIP

中国热带农业科学院环境与植物保护研究所柑橘黄 龙病检测中心通过 CMA 资质认定 摘要 柑橘黄龙病是一种严重危害柑橘产业的病害，给柑橘产业带来了严重的经济损失。因此，建立一套准确、快速、可靠的柑橘黄龙病检测技术，对于防控柑橘黄龙病具有非常重要的意义。本文介绍了中国热带农业科学院环境与植物保护研究所柑橘黄龙病检测中心通过 CMA 资质认定的技术路线及检测方法，包括实时荧光定量 PCR 技术和传统 PCR 技术，并进行了实验验证。结果表明，该技术路线和检测方法具有高准确性、高灵敏度和高特异性，可用于柑橘黄龙病的早期诊断和监测。 关键词：柑橘黄龙病；PCR 技术；准确性；灵敏度；特异性 Abstract Citrus Huanglongbing (HLB) is a serious disease that threatens the citrus industry and causes significant economic losses. Therefore, establishing an accurate, rapid, and reliable detection technique for HLB is of great significance for its prevention and control. This paper introduces the technical route and detection methods of the Citrus Huanglongbing Detection Center of the Institute of Environment and Plant Protection of the Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences that passed the CMA certification, including real-time fluorescence quantitative PCR technology and traditional PCR technology, and experimental validation. The results showed that the technical route and detection method had high accuracy, sensitivity, and specificity, and could be used for the early diagnosis and monitoring of Citrus Huanglongbing. Keywords: Citrus Huanglongbing; PCR technology; accuracy; sensitivity; specificity 引言 柑橘黄龙病是一种由斯里兰卡萎缩杆菌（Candidatus Liberibacter spp.）引起的病害，通过同病毒媒介的飞虫传播，造成柑橘树的叶片黄化、 枝干萎缩、果实变形、数量减少等症状，导致柑橘产量和品质下降，严 重危害柑橘产业。目前，柑橘黄龙病在世界范围内都已有报道。在中国，柑橘黄龙病也已成为柑橘产业面临的严重问题之一。 为了及时防控柑橘黄龙病的传播，建立一套准确、快速、可靠的检测技术就显得尤为重要。PCR 技术具有灵敏度高、特异性强、快速等优点，在柑橘黄龙病的检测中有着广泛的应用。 本文主要介绍中国热带农业科学院环境与植物保护研究所柑橘黄龙病检测中心通过 CMA 资质认定的技术路线和检测方法，并进行了实验验证，以期为柑橘黄龙病的早期诊断和监测提供一种可行的技术方案。 材料与方法 试验样品 本研究采集了 17 份柑橘黄龙病感染的样品和 13 份健康柑橘样品。包括柑橘树叶片、枝干和果实等。 核酸提取 使用 CTAB 法将试验样品中的总核酸提取出来，并进行纯化、定量和质量检测。 实时荧光定量 PCR 技术 使用 ABI7500 型实时荧光定量 PCR 仪器，设计并验证 HLB 特异性引物和探针，按照一般的 PCR 反应条件进行 PCR 反应，根据内参基因数量对目标基因的数量进行定量测定。 传统 PCR 技术 本研究采用传统 PCR 技术对 HLB 样品进行验证。以 16S rDNA 基因片段为目标位点，设计 HLB 特异性引物和探针，按照一般的 PCR 反应条件进行 PCR 反应，并用 1.2%琼脂糖凝胶电泳法检测 PCR 产物。 结果及分析 实时荧光定量 PCR 技术检测 以临界阈值 CT 值≤35 为阳性判断，实时荧光定量 PCR 技术检测结果显示 17 份柑橘黄龙病感染的样品中，有 17 份（100%）均为阳性，