植物显微技术实验指导.docVIP

实验一 利用流动细胞仪测定植物DNA含量 一、实验目的 1、了解流动细胞仪的基本构造、原理与应用。 2、熟悉流动细胞仪的基本操作。 3、学会流动细胞仪样品制备及结果处理。 二、实验原理 单个细胞、细胞群或其他生物微粒经过特异的荧光染料染色（DAPI或PI或免疫荧光标记）之后，在气体压力下，通过样品管引入到喷嘴内形成样品流，样品流经过激光束（488、405等）照射，样品流中的细胞吸收光能后发射出荧光，然后经相应的检测器检测，检测结果以直方图、二维散点图或三维立体图的形式显示出来。根据荧光强度与胞内生物大分子含量的比例关系，对细胞进行定量分析。 三、实验步骤 1、从野外取新鲜幼嫩的叶片（或竹笋） 。 2、将新鲜的叶片（或竹笋）切取1平方厘米大小，放进干净玻璃培养皿中。 3、加入500μL PARTEC公司流式细胞仪自带的cystain UV precise P Nuclei Extraction Buffer滴于样品上。 4、用双面刀片将样品剁碎，核提取2-3分钟。 5、然后再加入2mL 仪器自带的cystain UV precise P stain Buffer进行细胞核染色，染色4分钟后。 6、利用移液枪吸取染色后的样品，经公司自带的滤膜过滤到5mL的测量管中，进行测量。 四、结果与分析 水稻平均峰值25.25，用所测竹种的数值除以水稻平均峰值25.25就是该竹种的DNA含量所对应